八味中药对绵羊卵巢颗粒细胞增殖与保护的影响

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1、分类号密级UDC单位代码10733甘肃农业大学硕士学位论文八味中药对绵羊卵巢颗粒细胞增殖与保护的影响TheproliferativeandprotectiveeffectofeightkindsoftraditionalChinesemedicineonovrariangranulosacellsinsheep赵生军指导教师姓名张勇教授（甘肃农业大学兰州730070）郭宪副研究员（中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所）学科专业名称临床兽医学研究方向兽医产科学论文答辩日期2015年5月29日学位授予日期2015年6月答辩委员会主席严作廷研究员评阅人魏彦明教授冯若飞副教授2015

2、年6月ClassificationNo.：Secrecylevel：UDC：Schoolcode：10733GansuAgriculturalUniversityADissertationfortheMaster’sDegreeTheproliferativeandprotectiveeffectofeightkindsoftraditionalChinesemedicineonovrariangranulosacellsinsheepPostgraduate:ZhaoShengJunAdvisor:Professor.ZhangYongVice-researchfello

3、w.GUOXianSpeciality:ClinicalVeterinaryResearchField:VeterinaryObstetricsSubmittedTime:June.2015Address:Lanzhou,China,730070本实验是由以下基金资助完成：国家自然科学基金（31301976）国家科技支撑计划项目子课题（2013BAD16B09）甘肃省重大专项（1102NKDA022）Thisstudywasfundedbythecompletionofthefollowing:NationalNaturalScienceFoundationofChina（

4、No.31301976）NationalScienceandTechnologySupportProgramsub-topics（No.2013BAD16B09）MajorProjectsinGansuProvince（No.1102NKDA022）甘肃农业大学2015届硕士学位论文摘要摘要本研究利用细胞培养技术，观察了八味中药对绵羊卵巢颗粒细胞离体培养的影响；运用分子生物学、荧光定量等方法检测氯丙嗪、H2O2染毒对绵羊卵巢颗粒细胞凋亡基因Bax、Bcl-2mRNA表达的影响；研究了八味补虚中药对绵羊卵巢颗粒细胞增殖效果以及对染毒后的颗粒细胞的保护作用。研究结果如下：31、

5、体外培养颗粒细胞，密度小于10个/ml时，颗粒细胞会生长缓慢，会出现变6形现象。体外适宜培养密度为10个/ml左右。2、颗粒细胞培养过程中，黄芪、刺五加、龙眼肉、枸杞、女贞子、蛤蚧、菟丝-3-2子对颗粒细胞增殖具有促进作用，蛤蚧（1g/L、1×10g/L）、菟丝子（1×10g/L、-3-1-2-3-21×10g/L）、女贞子（1g/L、1×10g/L、1×10g/L、1×10g/L）、枸杞子（1×10g/L、-3-31×10g/L）、黄芪（1×10g/L）对卵巢颗粒细胞增殖极显著（P＜0.01），而熟地没有显著促进作用。3、颗粒细胞染毒试验中，氯丙嗪浓度在0.1μmol/L

6、以上对颗粒细胞生长抑制作用极显著(P＜0.01)，H2O2浓度在150μmol/L以上对颗粒细胞增殖抑制极显著(P＜0.01)。随着氯丙嗪、H2O2染毒浓度的增加，Bax、Bcl-2基因mRNA表达上调。4、黄芪、刺五加、熟地、龙眼肉、枸杞、女贞子、蛤蚧、菟丝子对氯丙嗪诱导的颗粒细胞损伤具有抑制作用。黄芪、刺五加、熟地、龙眼肉、枸杞子、女贞子、蛤蚧、菟丝子对H2O2引起颗粒细胞损伤具有抑制作用。关键词：中药；颗粒细胞；增殖；细胞凋亡；保护作用I甘肃农业大学2015届硕士学位论文summarySummaryInthisstudy,weobservedtheeffecteigh

7、tChinesemedicinesadditionwhenculturingSheepOvarianparticlescellinvitro.Usingmolecularbiology,particularlyreal-timePCR,wetestedtheexpressionchangesofapoptosisgenessuchasBax,Bcl-2afterchlorpromazineaddition,H2O2exposuresheepovariangranulosacells.Westudiedtheprom