Hp通过Akt信号通路诱导胃粘膜细胞发生上皮间质转化EMT的研究

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3、究背景：胃癌是全球第四大最常见的恶性肿瘤，也是我国第二大常见，是癌症相关死亡的主要疾病因素【I】。尽管近年来在胃癌的预防、早期诊断和治疗：疗面取得了长足的进展，全球胃癌的发病率和死亡率均有所降低，但在我国胃癌的发病率和死亡率仍居高不下，每年约有17万人死于胃癌，占所有癌症死亡人数的1／5。目前普遍认为，Hp是慢性胃炎的病原菌，在消化性溃疡的发生和复发中可能起重要作用[2】。1994年世界卫生组织／国际癌症研究机构(WHO／IARC)将幽门螺杆菌定为I类致癌原[3，41。EMT是指在胚胎发育、肿瘤转移

4、或组织纤维化过程中发生的上皮细胞脱黏附而转变成具迁移能力的问质细胞的现象，在细胞凋亡与增值、迁移与粘附中发挥重要作用。研究证实，Hp可通过激活胃癌卜皮细胞P13K／Akt信号通路诱导EMT，促进胃癌的侵袭和转移。但Hp感染正常胃粘膜细胞是否诱发EMT国内外未见明确报道。因此，探讨Hp感染正常胃粘膜是否通过P13K／Akt信号通路诱导胃粘膜发生EMT，从而导致增值、凋亡紊乱参与疾病发生，可进一步阐明Hp的致病机制，为Hp感染相关性疾病防治策略的制定提供新的理论和依据。研究方法：1、收集Hp阳性和阴性的

5、慢性非萎缩性胃炎、肠上皮化生、异型增生和胃癌病理标本(每组分别为39例、40例、39例和47例，其中再分为H口阳性和阴性，共165例)，行免疫组化检测Akt、p-Akt、GSK．3D、P．GSK．3B、E．cadherin和N．cadherin蛋白的表达。2、ATCC43504Hp标准菌株以MOI=50作用GES．1，同时以同体积细胞培养液作用的GES—l作为对照组，0、0．5、1、3、6和12h后，行Westernblot检测Akt—GSK．3B．EMT信号通路相关蛋白的表达。3、Akt抑制剂Ak

6、tInhibitorVIII109M预处理GES．11h，同时以同体积DMSO作用和未预处理的GES．1作为对照组，再以ATCC43504Hp标准菌株MOI=50作用lh，行Westernblot检测Akt．GSK．3p．EMT信号通路相关蛋白的表达。4、采用四唑蓝(MTT)EL色试验检测细胞存活率。研究结果：摘要(p<0．05)。N—cadherin蛋白表达在慢性非萎缩性胃炎、肠上皮化生和异型增生阶段Hp阳性和阴性组间亦无显著性差异(矿O．05)，而在胃癌阶段Hp阳性组N．cadherin蛋白表达

7、显著高于Hp阴性组(p<0．05)。2、Hp活菌对胃黏膜上皮细胞株Akt．GSK一3B．EMT信号通路的影响Hp活菌以MOI=50作用GES．1不同时间后，Akt、GSK3[3表达水平均无明显变化(p>O．05)，而p-Akt表达水平在作用后0．5h即升高，3h达到高峰，12h内均高于Oh(p<0．001)：p-GSK3p表达水平在作用后0．5h即增加，后逐渐升高，12h达到高峰(p<0．01)；E．Cadherin表达水平在作用后O．5h即减少，后逐渐降低，6h达到低谷，12h内均低于Oh(p<0

8、．05)；N—Cadherin表达水平在作用后0．5h即增加，后逐渐升高，3h达到高峰，12h内均高于0h(矽<0．001)。而对照组Akt、P—Akt、GSK．3p、p—GSK．3p、E—Cadherin、N．Cadherin蛋白表达水平均无明显变化(矿0．05)3、Akt在Hp活菌激活胃黏膜上皮细胞株Akt．GSK．3p—EMT信号通路中的作用(1)AktInhibitorVIII以101xM预处理GES．11h后，P—Akt(口<0．001)、P-GSK．3p(