穿心莲内酯诱导髓系白血病细胞株U937和HL60细胞凋亡的实验研究及机制初探

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1、中文摘要穿心莲内酯诱导髓系白血病细胞株U937和HL60细胞凋亡的实验研究及机制初探摘要目的：恶性肿瘤是危害人类健康最严重的疾病之一。全世界每年约有700万人死于肿瘤，我国的肿瘤死亡人数也在百万以上。白血病是造血系统的恶性肿瘤，约占癌肿总发病率的5％左右。白血病的治疗以化疗为主，其作用是全身性的，毒副作用大。虽然有骨髓移植、免疫治疗、基因治疗等治疗手段，但目前药物性化疗仍然是治疗白血病最重要和最基本的方法。化疗最大的缺点是，化疗药物在杀伤肿瘤细胞的同时也杀伤正常的组织和细胞，引起严重致死性的并发症。因此需要寻找新的更有针对性、低毒高效

2、的治疗药物。现有观点认为中西医结合治疗白血病的疗效优于单纯化疗。中草药可减轻化疗药的毒副作用，提高机体免疫力，并可用于难治性急性白血病(AL)的挽救性治疗。细胞凋亡(apoptosis)是数十年来在生命科学领域引起广泛兴趣和关注的研究热点。许多天然中草药可以通过干扰肿瘤细胞生长、代谢、增殖等过程，最终诱导触发肿瘤细胞发生凋亡。越来越多的资料表明无论是在杀伤肿瘤细胞或抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞分化、促进凋亡，调整机体免疫功能，改善症状与体征，还是减轻放化疗毒副作用或对肿瘤患者的调理，中草药都发挥着重要作用。近半个世纪来人们越来越关注

3、从传统中草药中提取有效成分用于临床抗肿瘤治疗。中文摘要穿心莲内酯(Andrographolide，Andro)是从穿心莲中提取纯化得到的二萜内酯类单体化合物，在抗病毒、诱导细胞分化、抗肿瘤及免疫调节等方面均有活性。穿心莲内酯的抗肿瘤作用机制主要表现为抑制肿瘤细胞增殖、阻滞肿瘤细胞周期进程并诱导细胞凋亡、提高淋巴细胞抗肿瘤活性等方面。本实验主要观察穿心莲内酯对白血病细胞株U937和HL60的体外增殖抑制和诱导凋亡作用，并对其抗肿瘤作用机制进行初步探讨，为穿心莲内酯作为抗肿瘤药物开发提供理论依据。方法：1采用CellCountingKit

4、．8试剂盒(CCK．8)检测不同浓度穿心莲内酯处理白血病细胞株U937和HL60细胞48小时后对U937和HL60细胞的增殖抑制作用，并求出IC50的值。2对穿心莲内酯处理过的白血病细胞株U937和HL60细胞以及对照组细胞，采用常规Giemsa染色和Hoechst33342荧光染色，光镜下观察穿心莲内酯作用于细胞后，细胞凋亡的形态学变化。3采用流式细胞技术(flowcytometry，FCM)分别检测不同浓度穿心莲内酯(20、40、80I_tmol／L)作用于U937细胞和HL60细胞48小时后，细胞凋亡变化和细胞周期分布的改变。4

5、采用逆转录．聚合酶链反应(reversetranscriptionPCR，RT-PCR)半定量检测不同浓度穿心莲内酯(20、40、80l上mol／L)作用48小时后，U937和HL60细胞内bcl^2、№BmRNA的表达变化。5应用CaspaSe．Glo检测试剂盒及比色法检测穿心莲内中文摘要酯作用48小时时，诱导U937和HL60细胞凋亡过程中caspase．3／7活力的变化。结果：1穿心莲内酯在l～1009mol／L浓度范围内能明显抑制白血病细胞U937细胞和HL60细胞体外增殖，抑制率呈明显的浓度依赖性，与对照组比较各组间差异有统

6、计学意义(尸

7、系，抑制率分别随着药物浓度增加而增加，与对照组相比具有统计学意义(P

8、升至67．93％)，Oo／G1、G2／M期细胞减少。同时两中文摘要种白血病细胞株产生明显的细胞凋亡．以809mol／L穿心莲内酯作用48h凋亡率最高，U937细胞达到52．48％，HL60细胞则为17．75％，凋亡不及U