地西他滨联合丙戊酸钠对白血病细胞株u937增殖及凋亡的影响及机制的研究

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1、河北医科大学硕士学位论文地西他滨联合丙戊酸钠对白血病细胞株U937增殖及凋亡的影响及机制的研究姓名：王凤云申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：张学军201203中文摘要地西他滨联合丙戊酸钠对白血病细胞株U937增殖及凋亡的影响及机制的研究摘要目的：白血病细胞耐药和复发仍然是目前阻碍患者长生存的主要原因，特别是对于老年和一般情况较差无法耐受强化疗的患者。表观遗传学药物为这些患者带来了新的治疗方法。目前常用的药物为DAN甲基转移酶抑制剂和组蛋白去乙酰化酶抑制剂。。地西他滨(decitabine，DAC)为DNA甲基转移酶抑制剂，能够抑制DNA甲基转移酶的

2、活性，逆转抑癌基因的异常甲基化，从而使沉默的抑癌基因激活，使白血病细胞恢复正常的分化和凋亡。地西他滨疗效肯定，同强化疗相比，安全性强，治疗相关死亡率低，是治疗白血病的新选择。现有研究表明组蛋白乙酰化药物能够干扰细胞周期、诱导细胞分化和凋亡，且发现其与DNA甲基转移酶抑制剂具有协同抗白血病作用。丙戊酸钠(Valproicacid，VPA)是传统的抗癫痫药物，近年发现其具有组蛋白去乙酰化转移酶的抑制作用，能够诱导白血病细胞凋亡。本实验以U937白血病细胞为研究对象，观察地西他滨联合丙戊酸钠对U937细胞的增殖抑制和促凋亡作用，并研究DAC对DNA甲基转移酶和

3、抑癌基因P15在mRNA水平的影响，初步探讨药物的作用机理．．方法：1常规培养人白血病细胞株U973，取对数生长期的细胞进行实验；2MTT法检测DAC、VPA及两药联合对U937细胞的增殖抑制；DAC的浓度分别为O．1、O．8、1．6mmol／L；VPA的浓度分别为1．0、3．0、5．0mmol／L；DAC(0．8mmol／1)联合VPA(1．0、3．0、5．0mmol／L)分别作用于U937细胞24、48、72小时，MTT检测细胞增殖抑制率。3AnllexinV／PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡：终浓度为0．1、O．8、1．6mmol／L的DAC，终浓

4、度为1．0、3．0、5．0mmol／L的VPA及DAC(0．8mmol／1)联合VPA(1．0、3．0、5．0mmol／L)分别作用于U937细胞72小时，PI染色，流式细胞仪检测细胞凋亡中文摘要4PI染色流式细胞术检测细胞周期变化；DAC浓度分别为O．1、O．8、1．6mmol／L作用于U937细胞72小时，PI染色、流式细胞仪检测细胞周期变化。5RP．PCR检测DNA甲基转移酶DNMTl、DNMT3A、DNMT3B及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子P15mRNA表达水平的变化：检测药物处理前后细胞目的基因mRNA表达的变化。6SPSS16．0软件分析，

5、分组资料以均数4-标准差表示，两组比较应用T检验方法，多组比较应用单因素方差分析，P<0．05为差异有统计学意义。结果：·1DAC、VPA及两药联合对U937细胞增殖的影响随着药物浓度的增加和作用时间的延长，DAC对U937细胞的增殖抑制率由10．1％增加到67．O％，各组进行统计学分析P<0．05，差异具有统计学意义；VPA的细胞增殖抑制率由17．6％增加到61．8％，各组进行比较显示，Ⅵ埝在5．0mmol／L时，48小时的增殖抑制率与24小时及72小时的增殖抑制率之间的差别无统计学意义(P>0．05)，VPA浓度在1．0、3．0mmol／L时各组间抑

6、制率有明显差异(P

7、P

8、PCR检测DNMTl、DNMT3A、DNMT3B及P15mRNA表达水平的变化未