地西他滨对k562细胞增殖、凋亡及wave1基因表达的影响

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1、AdissertationsubmittedtoZhengzhouUniVers时forthedegreeofdoctorTheef．fectofdemethylationpreparationdecit2【bineonProliferation，ApoptosisandⅥ啪1ExpressioninK562CellsByFuXueSupeⅣisor：Pro￡SunLingHematologyTheFirstA佑liatedHospitalofZhengzhouUniversityMarch2013原创性声明Ⅲ㈣㈣㈣圳l㈣川m㈣Y2547010本人郑重声明：所呈交

2、的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：日期：≯／眸5月。妒日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印

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4、来研究发现bcr／abl融合基因的甲基化与cML的发生、进展及预后密切相关。而CML与甲基化的关系主要表现在癌基因的低甲基化、抑癌基因的超甲基化及融合基因的超甲基化这三个方面。抑癌基因的高甲基化常常在肿瘤的发生发展过程中起着重要的作用，这使得应用去甲基化药物治疗肿瘤成为可能。去甲基化药物地西他滨(Decitabine，DAC)是一种特异的DNA甲基化转移酶(DNAmetllvlt砌sf．erase，DNMT)抑制剂。既往研究着重于DAC在白血病中发挥去甲基化作用，从而达到治疗目的。后来研究逐渐发现，DAc亦能够参与JAK．sTAT信号传导路径的活化，表明其可能通过

5、其他途径发挥促凋亡效应，但关于通过另外途径的可能作用基因，则研究较少。wASP家族Ve师mlin同源蛋白1(wAvEl)是wsP家族成员，是一种新型的抗凋亡蛋白，日前已证实在wAVEl基因在急性白血病患者中高表达，在正常人群中低表达或不表达。w州E1基因的表达异常与肿瘤的发生、肿瘤侵润及肿瘤耐药亦有着密切的关系。WA、，E1能够通过调控细胞周期、参与JAK—S仉钮信号转导通路参与细胞凋亡途径，发挥抗凋亡作用。目自玎，DAC对CML中耐摘要药基因表达是否存在影响的报道较少。因此，本实验选择不同浓度的DAC作用于白血病K562细胞系，观察其对K562细胞系的增殖抑制作

6、用分化作用及对耐药基因表达的影响。为DAC治疗CML急变或是耐药cML提供实验室依据。方法1．wsT-1测细胞增殖抑制率：采用终浓度分别为O．5岬ol／L、1岬01／L、5陋101／L、10“m01／L的地西他滨分别作用K562细胞12h、24h、48h、72h，确定地西他滨作用于细胞的适宜浓度与时间及Ic50值2．流式细胞术检测细胞凋亡：用5啪ol／L的地西他滨作用对数生长期的K562细胞48小时，应用流式细胞仪AmlexillVFITc／7ADD双染色法检测不同浓度地西他滨作用的硒62细胞凋亡率。3．流式细胞术检测细胞周期：用5邺∞1／L的地西他滨作用于对数生

7、长期的K562细胞48小时，应用流式细胞仪检测细胞周期的变化。4．ImPCR法检测WAVElmI蝌A的表达：用5pmol／L的地西他滨作用对数生长期的K562细胞48小时，应用RT-PCR法检测不同药物浓度下wAVElmIⅢA表达水平的变化。5．westemblot法检测wAVEl蛋白及Bcl．2蛋白的表达：用5岬ol／L的地西他滨作用对数生长期的K562细胞48小时，用westenlblot法检测wA、砸1蛋白及Bcl一2蛋白表达的变化。6．流式细胞术检测细胞分化：根据预实验结果，选1岬01／L的地西他滨作用对数生长期的K562细胞24小时、48小时及72小时后

8、，应用流式