地西他滨联合三氧化二砷对hl-60细胞增殖、凋亡的作用以及对dapk基因影响的实验研究

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2、#’河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特另,JDi：i以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：砌毽扁号-砌铆擗嬲砷，箩年孑月岁∥日万方数据目录中文摘要l英文摘要5英文缩写．10研究论文地西他滨联合三氧化二砷对HL．60细胞增殖、凋亡的作用以及对DAPK基因影响的实验研究前言刖舌一111一l材料与方法·13结果··19附图23附表28讨论··32结

3、论··35参考文献·36综述去甲基化药物治疗急性髓系白血病的研究进展4l致谢·49个人简历·50万方数据中文摘要地西他滨联合三氧化二砷对HL．60细胞增殖、凋亡的作用以及对DAPK基因影响的实验研究摘要目的：急性髓系白血病(acutemyeloidleukemia，AML)是一类起源于造血干细胞的恶性克隆性疾病，且其发病率有逐年上升的趋势。在过去的几十年里，AML的治疗已有了长足的进步，目前治疗的手段主要有联合化疗和在化疗基础上的造血干细胞移植。传统化疗的毒副作用和耐药复发严重影响着患者的总体生存

4、率，虽然骨髓移植是根治方法，但由于人类白细胞抗原不相合性以及移植后GVHD产生的风险，故限制了其在临床的广泛开展。因此，我们需要寻找新的药物来优化治疗方案，减少药物的毒副作用以及交叉耐药，以提高患者总体生存率。目前研究发现，白血病细胞基因启动子区DNA甲基化的发生率明显增高，特别是那些具有抑癌功能的基因启动子区发生的高甲基化。与基因突变不同，DNA甲基化是一种可逆转的基因修饰过程，故在肿瘤或癌前病变中可以通过去甲基化处理恢复基因的表达，从而达到防治肿瘤的目的。因此，DNA去甲基化作用将为血液系统肿

5、瘤的治疗提供新思路。地西他滨(decitabine，DAC)，又称为5．氮杂．2’．脱氧胞苷，作为一种DNA甲基化转移酶抑制剂对AML患者包括耐药、复发患者已显示出初步的疗效。目前DAC已成功应用于多种血液系统肿瘤，但在联合应用方面的研究仍比较少。三氧化_]iO(arsenictrioxide，AS203)是我国从中医药中发掘出来的治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)效果肯定的药物，已被美国NCCN的AML诊疗指南列为疾病持续不缓解或复发时挽救治疗的首选用药，是中西医结合治疗成功的经典例证。近年来，

6、去甲基化药物不断应用于临床，尤其是针对不适合应用标准化疗方案诱导缓解的AML患者，然而如何提高药物疗效并减轻副作用是目前一重要课题。本实验研究DAC、AS203对HL一60细胞(人急性髓系白血病细胞株1增殖、凋亡的作用以及对死亡相关蛋白激酶(deathassociatedproteinkinase，DAPK)基因表达的影响，探讨去甲基化药物治疗AML的作用机制，旨在为今后临床用药提供更多的理论依据。万方数据±圣塑墨方法：选取AML细胞株IlL．60为研究对象，并随机分组：空白对照组，DAC单药组(

7、209mol／L、401．tmol／L、801maol／L)，AS203单药组(1}tmol／L、2．5pmol／L、5pmol／L)，DAC联合AS203组(409mol／L+2．5p．mol／L、801amol／L+2．59mol／L、409mol／L+59mol／L、809mol／L+5pmol／L)，DAC预处理+AS203组(19mol／L、2．59mol／L、59mol／L)。评价不同浓度药物干预不同时间后对HL．60细胞增殖、凋亡的作用以及对DAPK基因表达水平的影响。每组实验均重复

8、3次。l用CCK8法初筛浓度并检测不同浓度药物作用24h、48h、72h对HL．60细胞的增殖抑制率；2用流式细胞术(FCM)检测不同浓度药物作用24h、48h、72h对HL．60细胞的凋亡率；3用RT-PCR法检测不同浓度药物作用HL．60细胞72h后DAPKmRNA的表达水平；4统计学处理。结果：1DAC、AS203对HL一60细胞增殖的影响1．1不同浓度的DAC、AS203单药对HL一60细胞作用24h、48h、72h后，随着药物浓度的增加和作用时问的延长，增殖抑制率逐渐升高