低氧环境下三氧化二砷对人肺癌细胞增殖和凋亡的作用论文

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1、低氧环境下三氧化二砷对人肺癌细胞增殖和凋亡的作用论文沈捷,曲歌平,修清玉,李兵【摘要】目的：观察常氧和低氧环境下不同浓度的三氧化二砷（arsenictrioxide,As2O3）对人肺腺癌细胞A549增殖和凋亡的影响。方法：在常氧（21%O2）和低氧（5%O2）环境下对人肺腺癌细胞A549进行体外培养，采用0、1、2、4μmol/LAs2O3分别作用A549细胞12、24和48h，甲基噻唑基四唑（methylthiazolyltetrazolium,MTT）法检测A549细胞增殖抑制率；膜连蛋白Ⅴ（AnnexinⅤ）/碘化丙啶（propidi

2、umiodide,PI）双标记法检测细胞凋亡。结果：常氧和低氧环境下，1、2、4μmol/LAs2O3均能显著抑制A549细胞增殖，促进细胞凋亡，且会随As2O3浓度的升高和作用时间的延长而增强；该作用在两种环境下的差异无统计学意义。结论：As2O3可抑制A549细胞增殖和促进细胞凋亡；在低氧环境和常氧环境下对A549细胞具有同样的细胞毒性作用。【关键词】砷化合物;低氧;细胞凋亡;细胞增殖;肺癌Objective:Toobservetheeffectsofdifferentconcentrationsofarsenictrioxide(As2

3、O3)onapoptosisandproliferationofhumanlungcancercelllineA549invitrounderhypoxiaandnormoxia.Methods:A549cellsol/LAs2O3for12,24and48hunderhypoxia(5%O2)andnormoxia(21%O2).TheproliferativeinhibitionrateofA549cellseasuredethylthiazolyltetrazoliumassay,andtheapoptoticrateofA549cel

4、lsiodide(PI)doublestaining.Results:Undernormoxiaandhypoxia,1,.freelol/LAs2O3couldsignificantlyinhibittheproliferationofA549cellsandinducetheapoptosisofA549cells.Theresultsdependedonthedrugconcentrationandactiontime.Andthehypoxiacouldn'tinfluencetheeffectsofAs2O3.Conclusion:

5、As2O3caninhibittheproliferationandinducetheapoptosisofA549cellsunderhypoxiaandnormoxia.Keyethylthiazolyltetrazolium,MTT）和二甲基亚砜（dimethylsulphoxide,DMSO）购自华美生物工程公司；As2O3由哈尔滨伊达药业有限公司惠赠；CytomicsFC500型流式细胞仪为美国Beckman公司产品；人肺腺癌A549细胞，购自中国科学院细胞库；GenbagMicroaer低氧培养袋，购自BioMerieux公司。1

6、.2实验方法1.2.1细胞培养人肺腺癌A549细胞，在37℃、5％CO2饱和湿度培养箱内，用含10%小牛血清的F12K培养基传代培养，0.125％胰蛋白酶消化，待细胞生长活力良好，处于对数生长期时应用。利用GenbagMicroaer低氧培养袋来构建低氧环境（5％O2），将细胞放入低氧培养袋中密封，然后置于37℃、5％CO2饱和湿度培养箱内培养。1.2.2MTT法检测细胞增殖抑制率取常氧（21％O2）和低氧（5％O2）环境下对数生长期的A549细胞，分别用含As2O30、1、2、4μmol/L的培养基接种于96孔培养板内培养，其中不加药组作为

7、对照，设3个复孔，每孔细胞密度约1×104/L，总体积200μl。在各自培养环境（常氧和低氧）下分别培养12、24和48h后，每孔加入5mg/ml的MTT工作液20μl，37℃继续培养4h，以300g/min离心5min，弃上清液，每孔加入DMSO10μl，震荡溶解结晶，在波长490nm处比色，据各孔吸光度（opticaldensity,OD）值反映细胞密度，以上实验均重复3次。实验中检测的增殖抑制率按以下公式计算：增殖抑制率=（对照孔OD值－实验孔OD值）/对照孔OD值×100%。1.2.3AnnexinⅤ/碘化丙啶双标记法检测细胞凋亡率取

8、常氧和低氧环境下对数生长期的A549细胞，分别用含As2O30、1、2、4μmol/L的培养基接种于24孔培养板内培养，以不含As2O3组细胞为对照组，每浓度设3个