三氧化二砷联合吉西他滨对鼠t细胞淋巴瘤体内外作用研究

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1、三氧化二砷联合吉西他滨对鼠T细胞淋巴瘤体内外作用研究StudyontheEffectofArsenicTrioxidecombinedwithGemcitabineonmiceT-celllymphomainvitroandinvivo作者姓名：祁啸领域（方向）：内科学指导教师：王秀丽教授类别：临床医学硕士答辩日期：2015年5月20日中文摘要目的：通过MTT法检测三氧化二砷(ArsenicTrioxide，ATO)和吉西他滨(Gemcitabine，GEM)单药及联合用药对鼠源性T细胞淋巴瘤系EL-4细胞株增殖的

2、体外抑制作用；复制C57BL/6小鼠T细胞淋巴瘤皮下移植瘤动物模型，研究三氧化二砷和吉西他滨单药及联合用药对该小鼠淋巴瘤模型的生长抑制作用并探讨可能的作用机制，为T细胞淋巴瘤的治疗模式提供实验基础及科学依据。方法：(1)采用MTT法分别检测ATO和GEM单药及联合应用对小鼠T细胞淋巴瘤细胞系EL-4细胞株的增殖抑制作用；(2)复制C57BL/6小鼠T细胞淋巴瘤皮下移植瘤模型，随机分为ATO单药组、GEM单药组及ATO与GEM联合用药组，单药组均选择高、低剂量两种药物剂量，并设定生理盐水为阴性对照组，分别于第8天和第

3、15天进行处死。给药期间观察各组小鼠的生存状态，测量小鼠体重。处死小鼠后，称量肿瘤组织，计算抑瘤率；留取肿瘤组织、淋巴结、肝脏及脾脏，固定、制片，对肿瘤组织行CD3免疫组化染色验证肿物为T细胞淋巴瘤，然后进行HE染色观察药物作用下淋巴瘤的病理形态及淋巴瘤是否存在淋巴结、肝、脾的转移，并对肿瘤组织进行TUNEL法组织细胞凋亡检测。结果：(1)药物ATO和GEM单药及联合用药对EL-4细胞的作用：ATO单药在2.5μmol/L~40μmol/L浓度范围下，随着药物浓度的增加，抑制细胞增殖作用明显增强。并且ATO浓度高

4、于20μmol/L时，对细胞抑制作用随着时间延长而逐渐增强。GEM单药在0.78125ug/L~50ug/L浓度范围内，随着药物浓度的增加细胞增殖的抑制作用明显增强。此外，在GEM浓度1.5625ug/L~50ug/L范围内，随着药物作用时间的延长对细胞的抑制作用逐渐增强。ATO和GEM联合用药结果显示，同一作用时间的同一浓度ATO和GEM1.5625ug/L联合用药组的细胞抑制作用比GEM0.78125ug/L联合用药组明显增强，此外，随着作用时间的延长而抑制率逐渐增高。联合用药组抑制率均高于ATO和GEM单

5、药组。④经公式计算得出两药联合效应在细胞实验条件下为协同作I用。(2)药物ATO和GEM单药及联合用药对T细胞淋巴瘤小鼠的体内作用：复制T细胞淋巴瘤EL-4细胞荷瘤C57BL/6小鼠皮下移植瘤模型，肿瘤组织行CD3免疫组化染色显示CD3弥漫性胞膜强阳性反应验证肿物为T细胞淋巴瘤，成瘤率为100%。抑制肿瘤作用最强的为第8天处死的ATO与GEM联合用药组，抑瘤率为49.65%，优于第8天处死的ATO低剂量组及GEM低剂量组。此外，第15天处死的荷瘤鼠抑瘤率低于第8天。经公式计算得出两药联合效应在体内实验条件下为相

6、加作用。肿瘤组织、淋巴结、肝脏、脾脏进行HE染色结果显示各实验组小鼠均存在上肢淋巴结转移，但下肢淋巴结转移有一定差异，第15天处死小鼠转移率明显高于第8天。④第8天处死的ATO高剂量组凋亡指数(AI)最高，第15天处死的生理盐水对照凋亡指数最低。凋亡指数从高到低依次为ATO高剂量组、ATO低剂量组、GEM高剂量组、GEM低剂量组、ATO/GEM联合用药组。结论：(1)在一定浓度范围内，三氧化二砷和吉西他滨单药对EL-4细胞增殖均有抑制作用；(2)实验条件下，三氧化二砷联合吉西他滨对EL-4细胞增殖均有明显抑制作用

7、，两药联合细胞抑制率高于同浓度单药，联合用药在细胞实验中具有协同效应；(3)三氧化二砷和吉西他滨单药均可抑制C57BL/6小鼠T细胞淋巴瘤皮下移植瘤生长，吉西他滨抑瘤作用优于三氧化二砷；(4)在实验条件下，三氧化二砷联合吉西他滨对C57BL/6小鼠T细胞淋巴瘤皮下移植瘤有明显抑制肿瘤生长作用，两药联合抑瘤率高于同浓度单药；联合用药在体内实验中具有相加效应；(5)三氧化二砷具有促进荷瘤鼠T淋巴瘤细胞凋亡作用。关键词：三氧化二砷，吉西他滨，淋巴瘤IIAbstractStudyontheEffectofArsenicTr

8、ioxidecombinedwithGemcitabineonmiceT-celllymphomainvitroandvivoObjective:Itwasdetectedbyarsenictrioxide(ATO)andgemcitabine(GEM)monotherapyorcombinationtherapyformurineTcelllymphoma