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时间:2018-11-19
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1、丙戊酸钠对慢性粒细胞白血病细胞株K562增殖和凋亡的影响论文..毕业【摘要】探讨丙戊酸钠(VPA)对慢性粒细胞白血病细胞株(K562细胞)增殖的影响及其可能机制。【方法】利用CCK-8法检测药物对细胞生长的影响;利用流式细胞仪检测药物处理后的细胞凋亡和细胞周期情况。【结果】VPA对K562细胞生长具有浓度-时间依赖性抑制作用;同时引起细胞凋亡增加(11.47%±0.25%),与正常对照组(4.77%±0.40%)比差异有统计学意义(P<0.05);G0/G1期细胞增多(82.30%±9.41%),S期细胞减少(12.
2、88%±6.99%),细胞被阻滞在在G0/G1期(P<0.05)。【结论】VPA能够阻滞K562细胞于G0/G1期,最终抑制肿瘤细胞增殖并诱导其凋亡。【关键词】丙戊酸钠性粒细胞白血病K562细胞增殖凋亡ofsodiumvalproate(VPA)ontheproliferationofchronicmyeloidleukemiacelllineK562,andtoexplorepossiblemechanisms.【Methods】K562cellsweretreatedwithVPA.Cellproliferati
3、onwasdeterminedbyCCK-8assay.Cellapoptosisandcellcyclewereanalyzedbyflowcytometry(FCM).【Results】VPAinhibitedtheproliferationofK562cellsinconcentration-andtime-dependentmanners.TheapoptosisratewassignificantlyhigherinthecellstreatedwithVPAthaninuntreatedcells[(11
4、.47%±0.25%)vs(4.77%±0.40%),P<0.05].AftertreatmentofVPA,cellcyclewasarrestedobviouslyatG0/G1phase(P<0.05).【Conclusions】VPAcouldinduceG0/G1phasearrest..毕业,inhibittheproliferationandinducetheapoptosisofK562cellsinvitro.Keywords:sodiumvalproate;chronicmyeloidleukem
5、ia;K562cell;proliferation;apoptosis近年来研究发现组蛋白去乙酰化酶抑制剂(histonedeacetylaseinhibitors,HDACI)可诱导多种肿瘤细胞生长阻滞、分化及凋亡[1-3]。丙戊酸钠(sodiumvalproate,VPA)是一种传统的抗癫痫药物,其在抗癫痫有效治疗浓度时也表现出很强的HDACI活性[4];慢性粒细胞白血病是临床上一种比较常见的恶性血液病,t(9;22)形成Ph染色体是其特征性细胞遗传学改变,由此形成的Bcr/Abl融合基因是其发病的分子机制和新药
6、物(如格列卫)作用靶点。尽管格列卫取得了极好的疗效,但临床仍然观察到耐药的情况[5]。所以为了克服耐药,临床上迫切需要开发新一代作用于Bcr/Abl融合基因的靶向药物或其他不同机制的抗肿瘤药物。本实验探讨了VPA对慢性粒细胞白血病急变期细胞株K562细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。1材料和方法1.1主要试剂VPA购自法国赛诺菲安万特公司。1640培养基为Gibco公司产品,胎牛血清(fetalcalfserium,FCS)购自杭州四季青生物公司。CCK-8试剂盒为碧云天公司产品,AnnexinV-FITC凋亡和细胞周
7、期分析试剂盒为BectonDickinson公司产品。K562细胞株由中山大学肿瘤研究所提供。1.2方法1.2.1细胞培养K562细胞用含100g/L灭活FCS的RPMI1640培养液重悬后,置于37℃、体积分数5%CO2饱和湿度培养箱中培养,每2~3天换液1次。1.2.2CCK-8方法分析细胞增殖活性取对数生长期的K562细胞,调整细胞终密度为1×105/mL接种于96孔板,分别加入0.5、1、2、5、10和25mmol/L的VPA,每孔总体积为200μL,另设空白孔和对照孔,每个浓度设3个复孔,于加药后72h检测
8、,每孔避光加入20?滋LCCK-8,继续孵育2h后用酶标仪检测A值,波长450nm。实验重复3次,取平均值。以药物浓度为横坐标,生长抑制率为纵坐标,绘制浓度-生长抑制率曲线。生长抑制率=[(A对照-A空白)-(A实验-A空白)]/(A对照-A空白)×100%。另外,通过上述试验结果计算出IC50值,然后以接近IC50值的浓度的VPA处理K562
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