丙戊酸钠对慢性粒细胞白血病细胞株ｋ５６２增殖和凋

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1、丙戊酸钠对慢性粒细胞白血病细胞株Ｋ５６２增殖和凋【摘要】探讨丙戊酸钠（ＶＰＡ）对慢性粒细胞白血病细胞株（Ｋ５６２细胞）增殖的影响及其可能机制。【方法】利用ＣＣＫ-８法检测药物对细胞生长的影响；利用流式细胞仪检测药物处理后的细胞凋亡和细胞周期情况。【结果】ＶＰＡ对Ｋ５６２细胞生长具有浓度-时间依赖性抑制作用；同时引起细胞凋亡增加（１１．４７％±０．２５％），与正常对照组（４．７７％±０．４０％）比差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；Ｇ０／Ｇ１期细胞增多（８２．３０％±９．４１％），Ｓ期细胞减少（１２．８８％±６

2、．９９％），细胞被阻滞在在Ｇ０／Ｇ１期（Ｐ＜０．０５）。【结论】ＶＰＡ能够阻滞Ｋ５６２细胞于Ｇ０／Ｇ１期，最终抑制肿瘤细胞增殖并诱导其凋亡。【关键词】丙戊酸钠性粒细胞白血病Ｋ５６２细胞增殖凋亡　ｏｆｓｏｄｉｕｍｖａｌｐｒｏａｔｅ（ＶＰＡ）ｏｎｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｃｈｒｏｎｉｃｍｙｅｌｏｉｄｌｅｕｋｅｍｉａｃｅｌｌｌｉｎｅＫ５６２，ａｎｄｔｏｅｘｐｌｏｒｅｐｏｓｓｉｂｌｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ．【Ｍｅｔｈｏｄｓ】Ｋ５６２ｃｅｌｌｓｗｅｒｅｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＶＰＡ．Ｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔ

3、ｉｏｎｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙＣＣＫ-８ａｓｓａｙ．Ｃｅｌｌａｐｏｐｔｏｓｉｓａｎｄｃｅｌｌｃｙｃｌｅｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｂｙｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ（ＦＣＭ）．【Ｒｅｓｕｌｔｓ】ＶＰＡｉｎｈｉｂｉｔｅｄｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆＫ５６２ｃｅｌｌｓｉｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ-ａｎｄｔｉｍｅ-ｄｅｐｅｎｄｅｎｔｍａｎｎｅｒｓ．ＴｈｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｒａｔｅｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｉｎｔｈｅｃｅｌｌｓｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＶＰＡｔｈａｎｉｎｕｎｔｒｅａｔｅｄｃｅｌ

4、ｌｓ［（１１．４７％±０．２５％）ｖｓ（４．７７％±０．４０％），Ｐ＜０．０５］．ＡｆｔｅｒｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆＶＰＡ，ｃｅｌｌｃｙｃｌｅｗａｓａｒｒｅｓｔｅｄｏｂｖｉｏｕｓｌｙａｔＧ０／Ｇ１ｐｈａｓｅ（Ｐ＜０．０５）．【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ】ＶＰＡｃｏｕｌｄｉｎｄｕｃｅＧ０／Ｇ１ｐｈａｓｅａｒｒｅｓｔ，ｉｎｈｉｂｉｔｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｉｎｄｕｃｅｔｈｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｏｆＫ５６２ｃｅｌｌｓｉｎｖｉｔｒｏ．　　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｓｏｄｉｕｍｖａｌｐｒｏａｔｅ；ｃｈｒｏｎｉｃｍｙｅｌ

5、ｏｉｄｌｅｕｋｅｍｉａ；Ｋ５６２ｃｅｌｌ；ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ；ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　　近年来研究发现组蛋白去乙酰化酶抑制剂（ｈｉｓｔｏｎｅｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ，ＨＤＡＣＩ）可诱导多种肿瘤细胞生长阻滞、分化及凋亡［１-３］。丙戊酸钠（ｓｏｄｉｕｍｖａｌｐｒｏａｔｅ，ＶＰＡ）是一种传统的抗癫痫药物，其在抗癫痫有效治疗浓度时也表现出很强的ＨＤＡＣＩ活性［４］；慢性粒细胞白血病是临床上一种比较常见的恶性血液病，ｔ（９；２２）形成Ｐｈ染色体是其特征性细胞遗传学改变，由此形成的Ｂｃｒ／Ａｂｌ

6、融合基因是其发病的分子机制和新药物（如格列卫）作用靶点。尽管格列卫取得了极好的疗效，但临床仍然观察到耐药的情况［５］。所以为了克服耐药，临床上迫切需要开发新一代作用于Ｂｃｒ／Ａｂｌ融合基因的靶向药物或其他不同机制的抗肿瘤药物。本实验探讨了ＶＰＡ对慢性粒细胞白血病急变期细胞株Ｋ５６２细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响。　　１材料和方法　　１．１主要试剂　　ＶＰＡ购自法国赛诺菲安万特公司。１６４０培养基为Ｇｉｂｃｏ公司产品，胎牛血清（ｆｅｔａｌｃａｌｆｓｅｒｉｕｍ，ＦＣＳ）购自杭州四季青生物公司。ＣＣＫ-８试剂盒为

7、碧云天公司产品，ＡｎｎｅｘｉｎＶ-ＦＩＴＣ凋亡和细胞周期分析试剂盒为ＢｅｃｔｏｎＤｉｃｋｉｎｓｏｎ公司产品。Ｋ５６２细胞株由中山大学肿瘤研究所提供。　　１．２方法　　１．２．１细胞培养　　Ｋ５６２细胞用含１００ｇ／Ｌ灭活ＦＣＳ的ＲＰＭＩ１６４０培养液重悬后，置于３７℃、体积分数５％ＣＯ２饱和湿度培养箱中培养，每２～３天换液１次。　　１．２．２ＣＣＫ-８方法分析细胞增殖活性　　取对数生长期的Ｋ５６２细胞，调整细胞终密度为１×１０５／ｍＬ接种于９６孔板，分别加入０．５、１、２、５、１０和２５ｍｍｏｌ／Ｌ的ＶＰＡ

8、，每孔总体积为２００μＬ，另设空白孔和对照孔，每个浓度设３个复孔，于加药后７２ｈ检测，每孔避光加入２０?滋ＬＣＣＫ-８，继续孵育２ｈ后用酶标仪检测Ａ值，波长４５０ｎｍ。实验重复３次，取平均值。以药物浓度为横坐标，生长抑制率为纵坐标，绘制浓度-生长抑制率曲线。生长抑制率＝［（Ａ对照－Ａ空白）－（Ａ实验－Ａ空白）］／（Ａ对照－Ａ空白）×１００％。另外，通过上述试验结果计算出ＩＣ５０值，然后以接近ＩＣ５０值的浓度的ＶＰ