cdx2在慢性粒细胞白血病细胞株k562细胞中的表达及意义

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1、CDX2在慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞中的表达及意义张青兰1（通讯作者）刘延方2范玮3（1郑州市第二人民医院内七科450000）（2郑州大学第一附属医院血液科450003；3郑州市第五人民医院血液科450053）【中图分类号】R733.7【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）12-0145-03【摘要】目的为探讨CDX2在慢性粒细胞白血病中的表达情况，木实验应用RT-PCR方法检测慢慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞单个核细胞中CDX2mRNA的表达水平。方法慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞由郑州大学基

2、础医学院干细胞中心惠赠和10例非恶性血液病患者的骨髓液，检测CDX2mRNA在慢性白血病中的表达情况。结果CDX2mRNA在慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞中高表达。结论提示CDX2与慢性粒细胞白血病的发生发展可能有关。ExpressionandclinicalsignificanceofCDX2inchronicmyelogenousleukemia【Abstract】ObjectiveJnordertoinvestigatetheexpressionofCDX2inchronicmyelogenousleukemia,mRN

3、AexpressionofCDX2inbonemarrowcellsfrompatientswithchronicleukaemiapatientandchronicmyeloidleukemiacellline-K562cellwillbeassessedbyRT-PCR.Method:Chronicmyelogenousleukemiacellline-K562cellwaskinderlyprovidedbyStemCellResearchCenterofZhengzhouUniversityand10examplenonm

4、alignantnosohemiapatient'smarrowfluid,companyCDX2mRNAinchronicmyelogenousleukemiaexpressionsituation.Results:K562cellalsoexpressedhighlevelofCDX2mRNA.Conclusion:IndicatingthatCDX2maycontributetothegrowthanddevelopmentofchronicmyelogenousleukemia.为探讨CDX2在白血病中的表达情况，木实验应

5、用RT-PCR方法检测慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞单个核细胞中CDX2mRNA的表达水平，初步探讨CDX2在白血病发生、发展中的作用。一材料与方法1研究对象及分组细胞株为慢性粒细胞白血病急变期细胞株K562细胞，由郑州大学基础医学院干细胞中心惠赠；对照组为骨髓正常的非恶性血液病患者10例。2实验方法(1)申个核细胞的分离细胞株申个核细胞的分离，取EDTA抗凝的骨髓液或细胞株2-4ml，加等量淋巴细胞分离液离心，取中间白膜层，用生理盐水洗涤2次，取lul标本液置光学显微镜下做单个核细胞计数，取约l×107个细胞的标

6、本液，离心去上清，力口入lmITRIZOL，-80°C保存待用。(2)RNAisoreagent提取细胞总RNA取-80°C保存的标本，室温静置5〜10分钟，使其充分溶解，依次加入三氯甲烷、异丙醇、75%乙醇洗涤沉淀，溶解于20μlRNase-free水中。对RNA的完整性和纯度进行鉴定，所提取RNA于-80°C冻存或进行逆转录反应。(3)cDNA的合成CDNA合成按逆转录试剂盒(四川天泽生物工程有限公司)说明书操作步骤进行。反应体系20μl，包括总RNA3μg，随机六合引物(0.2μg/μl)/ol

7、igo(dT)18(0.5μg/μl)lμl,补RNase-free水至12μlo70°C水浴5分钟，置冰上，加5×逆转录缓冲液4μl，RNA酶抑制剂(40U/μl)lμl,dNTP2μl,37°C水浴5分钟，置冰上，加AMV逆转录酶lμl(200U)，反应终体积为20μl。42°C水浴60分钟,再70°C水浴10分钟终止反应，然后放置在冰上待用。合成的cDNA可以直接作为PCR模板使用，不需要纯化。(4)引物合成引物由上海生物工程技术有限公司合成：CDX2正

8、义链：5’-CTCCTCCCCAGCTCTTCTCT-3’；反义链:5’-TAAACAAGTCCCTGTTCGGG-3’；扩增产物长度：365bp；β-actin正义链：5’-G