大萼香茶菜甲素体外诱导白血病细胞株hl60的分化和凋亡

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1、浙江大学硕上学位论文大萼香茶菜甲素体外诱导白血病细胞株HL．60的分化和凋亡浙江大学医学院免疫学硕士研究生吴建国导师夏大静中文摘要目的：研究大萼香茶菜甲素(MA)抑制白血病细胞株HL-60增殖，诱导细胞分化和凋亡作用，并对其作用机制进行初步探讨。方法：将不同浓度的MA与HL-60细胞在体外培养，台盼蓝染色、MTT比色法观察对HL一60细胞增殖的抑制作用；细胞形态学、DNA含量、DNA梯度电泳及细胞周期分析、Annexin．Ⅷl双标记和Hoechst33258荧光染色等分析细胞凋亡；通过细胞表面抗原CDllb、CDl3、CDl4，NBT试验和细胞形态学检测MA对HL．60细胞的分化作用；流

2、式细胞术检测Bcl．2、Bax、P53、Fas和线粒体膜蛋白、线粒体跨膜电位(Arm)的表达变化；RT-PCR检测Bcl．2、Bax、P53、caspase一3mRNA变化。结果：MA呈时效及量效性地抑制HL．60细胞的增殖和活力，8lxg／mlMA作用HL-60细胞24～72h后，MTr法检测24h、48h、72h的细胞增殖抑制率分别为(52．9±0．3)％、(70．0_1．o)％和(75．3-+1．2)％，均显著高于对照组(P

3、化，出现典型的细胞形态改变，经4-20}tg／ml的MA作用后，SubGl由(2．85_+1．6)％浙江大学硕上学位论文上升-T．(51．7±5．9)％，与对照组(1．7410．5)％相比具有显著性差异(P

4、A作用的浓度增加，caspase．3表达升高、线粒体膜电位(△甲m)下降、而线粒体膜蛋白表达显著升高。结论：MA能抑制HL．60细胞增殖和细胞活力、诱导HL-60细胞向粒系分化、促进细胞凋亡，其机制与上调bax基因和bax／bcl．2比值、caspase．3激活与线粒体膜电位显著下降等有关。[关键词]大萼香茶菜甲素白血病细胞凋亡细胞分化浙江大学硕士学位论文StudyontheDifferentiationandApoptosisofHL-60LeukemiaCellsInducedbyMA／nvitroZhejiangUniversityImmunologyPostgraduateJia

5、nguoWuAdvisorDajingXiaAbstractObjective：TostudytheeffectofMAonproliferationinhibition，differentiationandapoptosisinHL一60humanleukemiacelllineandexploreitspossiblemechanisms．Methods：DifferentconcentrationofMAandthedifferenttimeofcultivationwereusedtotreatHL-60cell．Theproliferationinhibitionwasanal

6、yzedbyTrypanbluestainingandMTFassay．Cellapoptosiswasanalyzedbycellmorphology,DNAagarosegelelectrophoresis，DNAcontentandcellcycleanalyzation，Annexin-V／PI，Hoechst33258fluorescencestaining．Thecellmorphologicalanalysis，expressionofCDllb，CDl3，CDl4，wereperformedtoevaluatedifferentiationofHL一60cells．The

7、expressionsofbcl一2，bax，Fas，P53andmitochondrialmembraneproteinwereanalyzedbyflowcytometry,Whilethemitochondrialtransmembrancepotential(Arm)waslabeledbydihydrorhodamin123．RT-PCRmethodwasusedtostudythebcl一2、bax、p53、caspas