吸水链霉菌谷氨酰胺转胺酶的活化机制和生理功能

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1、江南大学博士学位论文吸水链霉菌谷氨酰胺转胺酶的活化机制和生理功能姓名：张东旭申请学位级别：博士专业：发酵工程指导教师：陈坚;吴敬20080601摘要白酶。10mmol／L的EDl’A抑制下，无细胞上清液中TGaSe的酶活没有增加，Pr0．TGaSe和TGase的电泳条带浓度也保持稳定；1lIulloⅥ。的PMSF抑制下，TGase的酶活的增加以及Pr0．TGase蛋白条带向TGase蛋白条带的转化过程明显滞后。4．TAPI的纯化和鉴定及性质研究。通过FractogelEMDS03。柱和PhenylSepharose6F．F．柱对TAPI进行纯化，TAPI的蛋白收率为6．36mg

2、／L。TAPI(O．4嵋)能够抑制TAP(0．2鹇)对Pro-TGase(2鹇)的活化。TAPI的N．端氨基酸序列为：GI，YAATTAI，v，属于SSI蛋白家族。TAPI具有表面活性，在液体培养中主要分布在气液界面。5分钟内，TAPI(O．1m咖L)使水的界面张力从72降到60mJ／m2。在此基础上，提出了基于TAPI界面分布的TGase活化过程调控模型。5．在S矗增加sc印fc硼固体培养中，TGase在菌体发生分化、形成气生菌丝时开始分泌和活化，并在形成孢子后停止活化，它可能参与了分化过程。TGase在＆矗耀阳sc印缸淞营养菌丝的的生长阶段并不分泌，而是在开始生分化形成气生

3、菌丝时才开分泌和活化，并在形成孢子后停止活化。48h固体平板上开始出现白色的气生菌丝的同时，检测到胞外蛋白浸提液中TGase活性显著提高(0．51U／plate)；144h固体平板上开始出现黑色孢子，此后已检测不到TGase活性。Pro．TGaLse当量活性在48h开始出现(0．03U／plate)，之后逐渐升高并在菌体形成孢子后保持稳定(0．65U／plate左右)。胱胺能够抑制＆Ji{增加scDpfc珊液体培养种纯化到TGase的活性，25mmo讥，的胱胺可以抑制活性为0．17U／mL的TGase75％的活性。25舢[Ilon。的胱胺能够显著延迟S办增加J∞pfc淞的分化过

4、程。关键词：谷氨酰胺转胺酶，吸水链霉菌，活化机制，生理功能。IIAbstractAbstraCtTraIlsglu伽mnase(’rGase；Protein—911na瑚ine—gl咖yltraIlsferase，EC2．3。2．13)is觚e懿刁径ec神曲leof弧觚d疆ei蔽geoV蕾e躐cfoss-li放sb丽黼睨p∞tei魅s豁well8s辨蛳&s。TGaseisaVe巧importallte舭ymeiIlfoodindust巧aIldhaS掣eatpotential印plicationinpha黝aceuticalandteXtileindustries．脚幻班弦gs

5、TGaseis也eomy∞删mercialen巧me也atcouldcoV越entprotei璐．Ithasbee鼓reported像atTGase叠om脚幻磁弦嚣掰D69搬g淞括wassecretedasz)嗽ogenaIldcouldbeactiVatedbyprotease．Ho、Ⅳever，IloI拳“denceexplain也e爹姆siological血辩tionof&哩喊豫弦嚣T(蠢囊se；8nd娃羚越eeha越smofTGaSeactiv短强w黼Stillunclearill脚幻碾弦船．Recently，iIlourlab，anews扛aincapableofpr

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