不吸水链霉菌的生物活性成分分离

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1、分类号⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯UDC密级⋯公⋯五⋯⋯舅翥庐夕擎硕士研究生学位论文不吸水链霉菌的生物活性成分分离申请人：学号：培养单位：学科专业：研究方向：指导教师：完成日期：赵维2111378农业资源与环境学院植物保护农业昆虫与害虫防治王庆贵教授徐利剑副教授2014年3月28日＼删必中文摘要本实验所选的研究对象是一株来自土壤的不吸水链霉菌。前期结果证明它具有良好的抗菌活性。同时经过初步的化学分析和检测，表明此不吸水链霉菌所产生的活性物质的化学结构不同于以往在链霉菌中分离到的化合物。本研究利用多种色谱相结合的分离方法和波谱结构鉴定技术，对该株不吸水链霉菌发酵液中的

2、抗菌活性物质进行了研究。利用多种色谱相结合的方法对不吸水链霉菌的抗菌活性物质进行了分离和纯化。首先对不吸水链霉菌发酵菌液采用大孔吸附树脂AB．8进行粗分，利用水-乙醇系统(1：0，1：3，2：2，3：1，0：1)极性由高到低梯度洗脱，每个浓度进行5倍柱体积淋洗，将淋洗液减压浓缩，获得6个组分。然后依据薄层层析与抗菌活性测定结果，将75％乙醇层部分和100％乙醇层部分合并，作为主要分离部分。将其溶解后，利用中压正相硅胶柱层析、葡聚糖凝胶SephadexLH-20柱层析、正相硅胶制备薄层层析、高压反相硅胶柱层析等方法进行分离，获得5个化合物。不吸水链霉菌活

3、性成分的结构鉴定。采用波谱学技术，质谱、核磁共振氢谱、核磁共振碳谱对分离得到的化合物进行结构解析和鉴定，确定了化合物5的化学结构，分子量为353．13341，可以推断出该化合物的分子式为C20H19N05。以革兰氏阳性细菌枯草芽孢杆菌与革兰氏阴性细菌花生青枯病菌为供试菌株，采用96孔板连续稀释．MTT生物自显影法测定化合物5的最小抑菌浓度(MIC)。结果表明，化合物5对枯草芽孢杆菌与花生青枯病菌具有较好的抗菌作用，对枯草芽孢杆菌表现出较强的抗菌活性，最小抑菌浓度为1699／ml，对花生青枯病菌的最小抑菌浓度值是6499／ml，阳性对照硫酸链霉素对花生青

4、枯病菌和枯草芽孢杆菌的最小抑菌浓度均为161ag／ml。T黑龙江大学硕士学位论文关键词：不吸水链霉菌、抗菌活性、花生青枯病、农用抗生素AbstractAstrainofStreptomycesahygroscopicuswasisolatedfromsoil．Wehavedetecteditsantimicrobialactivitybeforethisproject．Theresultsofantimicrobialactivitytestsshowedithadstrongantimicrobialactivity．Meanwhileprelimi

5、narychemicalanalysisandtestindicatedthechemicalstructureofitsactivecompoundwasdifferenttoothercompoundsfromStreptomyces．Inthisstudy,severalchromatographictechniquesandspectroscopicmethodswereusedtoinvestigatetheseparationandstructureidentificationofantimicrobialcompoundsfromthes

6、train．Severalchromatographictechniqueswereusedtostudytheseparationandpurificationofantimicrobialcompound．Fermentationbrothofs．ahygroscopicuswasadsorbedbyAB-8macroporousresin，elutedwithH20一Ethanol(1：0，1：3，2：2，3：1，0：1)．Fivefractionswereobtained．Thefractionselutedby75％ethanoland100

7、％ethanolwerecombinedasaseparationobjective．Thenitwasseparatedbycolumnchromatographyofsilicagel，SephadexLH一20columnchromatography,Preparativethinlayerchromatographyandhighperformanceliquidchromatography．Fivecompoundswereobtained．TheactivecompoundfromS．ahygroscopicuswasidentifiedb

8、yspectroscopictechniques，suchasmassspectrometry