苦胆链霉菌yj1活性代谢产物的分离纯化及其粗提物对油菜菌核病的生物防治

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1、分类号进适学号ＳＳ２０１２２四川巧化大学硕±学位论文苦胆链霉菌ＹＪ１活性代谢产物的分离纯化及其粗提物对油菜菌核病的生物防治＇■＇＇Ｉ徐乂指导教师黄云熱巧学科专业植赖病理学研究方向植物病害生物防治２０１５年５月？４；ｙ．，？＇？＊ＩＳｉｃｈｕａｎＡｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｇｙＰｈ．Ｄ．ＤｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎＳｅａｒａｔｉｏｎａｎｄｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆａｃｔｉｖｅｍｅｔａｂｏｌｈｅｓｒｏｄｕｃｅｄｂｐｐ

2、ｐｙ＊ＳＶｒ化ｗｙｃｅｓＹＪ１ａｎｄｔｈｅｂｉｏｃｏｎｔｒｏｌｏｆ旅／ｅｒｏｄｎ／幻啤於ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍｂｉｔｓｃｒｕｄｅｅｘｔｒａｃｔｓｙＢｙＪｉｅＸｕＡｄｖｉｓｏｒ：Ｐｒｏｆ．ＹｕｎＨｕａｎｇＭａｏｒ：ＰｌａｎｔＰａｔｈｏｌｏｊｇｙＤｉｒｅｃｔｉｏｎ：ＢｉｏｌｏｉｃａｌＣｏｎｔｒｏｌｏｆｌａｎｉｓｅａｓｅｓｇＰｔＤＭａｙ２０１５，论文独御性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知，除了

3、文中特别加标注和致谢的地方外，学位论文中不包含其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或其它教育机一构的学位或证书所使用过的材料。与我同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。〇，：尔身ｒ年研究生签名《、＾＾月／／円关于论文巧用授巧的声明，自本人完全了解四川农业大学有关保留：、使用学位论文的规定Ｐ学校有权保留并向国家有关部口或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可Ｗ采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四川农

4、业大学可Ｗ用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。［＾本论文不保密。□本论文保密，在解密后适用本授权。＿年＿＂＂（请在ｔＵ上□内划Ｖ）？＇方＾５研究生签名：＾令杀年＾月日６＇Ｉ导师签名：＾年月日四川农业大学硕＋毕业论文摘要油菜是我国乃至世界上的重要油料作物，利用抬，油菜苗核病是限制油菜生产的主要因素一一抗放线苗防治油菜菌核病是种安全有效的生物防治手段，。因此进步研究掉抗放线菌次级代谢产物有效组分对于硏发出防治油菜茵核病的新型农用抗生素具有重要意义。本试验Ｗ实验室

5、前期工作中筛选出的一株对油菜菌核病菌有较强枯抗活性的苦胆链霉菌况一ＹＪ，，１为研究对象通过系列方法和技术测定了活性代谢产物的分布及理化性质对其活性物质进巧分离纯化，并测定了其发酵液粗提物的毒力和抗菌谱及其对油菜菌核病的室内盆栽防治一效果，为生防放线菌的进步开发利用提供了试验依据：。主要研究结果如下１．放线菌ＹＪ１活性代谢产物的分布及理化性质研究一本章通过系列试验，确定活性代谢产物广泛分布于放线菌ＹＪ，１发酵上清液和菌丝体中９．。，，抑菌率分别为１．１５％、８６９５％然而茜丝体活性物质的酸碱稳定性和热稳定性均非

6、常差不一一利于进步分离纯化，巧此，仅选取发酵上清液做下步研究，菌丝体部分则直接过滤舍弃。同时，发醇上清液中，活性物质的酸碱稳定性和在中性及碱性条件下的热稳巧性均较好，抑菌率达到８８，．５１％Ｌ：Ａ上，Ａ在酸性条件下溫度过高会对活性物质造成破坏所Ｗ应避免在酸性条件下对活性产物进行髙温处理。通过比较二氯甲院、乙酸己醋和正Ｔ醇在不同ｐＨ值条件下对活性（）物质的萃取效果，确宏正了醇在碱性条件下ＨｌＯ是最佳的萃取条件，溶ｐ。此外解性研究结果表明，活性代谢产物的醇溶性较好，可初步判断其极性中等偏大。２．放线菌ＹＪ１活

7、性代谢产物的分离纯化放线苗ＹＪ１活性产物的分离纯化过程主要包括预处理、萃取、薄层层析（ＴＬＣ）条件探索、珪胶柱层析分离（ＨＰＬＣ）分析。研究结果为：（１）预处理中，、ＴＬＣ产物制备、高效液相色谱＝桂将发酵液的Ｈ值调为５Ｗ去除杂质：（２）ＴＬＣ确定溶剂系统为正Ｔ醇：甲醇５：１（Ｖ／Ｖ）；（３）ｐ胶柱层析中，采用巧度洗脱，淋洗荆为正Ｔ醇与甲醇；（４）ＨＰＬＣ分析条件：分析色谱柱；Ｋｒｏｍａｓｉｌ－Ｘ＝５Ｃ１８２５０４．６ｍｍ／：乂ｍＬ／ｍｉｎｎｍ１００；流动相：艺腊冰８０：２０（ｖｖ）；流速０；检测波长

8、：２１０；‘色谱柱温度：２５Ｃ。Ｉ四川农业大学硕壬毕业论文３１．放线菌ＹＪ发醇液粗提物毒力及抑菌谱测定放线菌ＹＪ１发酵液经过预处理后，萃取得到其粗提物。粗提物毒力测定结果表明，ＥＣｓｏ为巧７３７．１９／，Ｅ