贝类NO系统及其在神经内分泌免疫调节网络中的作用机制研究

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2、uteofOceanology'ChineseAcademyofSciencesMay'2013原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任人由本人承担。论文作者签名：苏默为日期：p，≥、s．印学位论文版权使用授权书本人完全了解中国科学院海洋研究所有关保留、使用学位论文的规定，同意海洋研究所保留并向国家有关部门或机构送交学位

3、论文的复印件和电子版，允许学位论文被查阅和借阅。本人授权中国科学院海洋研究所可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存、汇编本学位论文。(保密论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签字：铭缺若导师粹立干艺日期：矽f≥。y、>o日期：pf≥．∑。七致谢本论文是在导师宋林生研究员的悉心指导和亲切关怀下完成的。自论文的选题伊始，宋老师就敦敦教诲，不辞辛劳，并对整个实验方案的设计以及研究工作的开展、论文的撰写和修改劳心劳力。宋老师精辟的见解，敏锐的洞察，活跃的思维，渊博的学识，以及严谨求

4、实的科研态度是我们科研工作中的楷模。在学习生活中，宋老师关怀备至，以身作则，严于律己、宽以待人，教以我们人生的态度和辨析价值的能力，在此谨向宋老师致以最诚挚的感谢和最崇高的敬意!感谢本实验室王玲玲、周智老师在实验思路和工作方法上的启迪、指导和大力帮助，感谢他们在论文修改中的耐心仔细和孜孜不倦，以及在人生方向上的指导关怀和无私帮助。感谢充满活力而团结奋进的集体为我的研究工作提供了良好的环境。感谢邱丽梅、张垣、刘瑞、王孟强老师，感谢王兴强、孙志宾、史晓伟、杨传燕、Vinu、王雷雷、岳峰、高扬、王晶晶、衣启麟、黄萌萌、吴田田等师兄师姐

5、，孙瑞、郭颖、马照鹏等同学，以及张涛、张道祥、孙颖、孙鑫、郝佳等师弟师妹，在这三年来对我的热情帮助和关怀，是你们的帮助让我顺利完成了论文中的工作，是你们的关怀让我度过了人生伏落的光阴，感谢有你们相伴，让我与你们一同奋进、一同收获，这些日子将是我永远的回忆。感激开放室高强老师、邓涪老师、邓田老师尽职尽责的工作态度和为本研究提供的便利条件，感谢研究生部各位老师给予的支持和帮助。感谢我的家人、朋友对我始终如一的支持与鼓励，你们对我无私的付出和一如既往的关怀，我将永远铭记在心!衷心的祝愿你们健康平安!对所有在科研与生活中关心、帮助和支持

6、我的人表示衷心的感谢!感谢国家973、863项目及自然科学基金对本研究提供的资助。蒋秋芬2013年5月于青岛摘要贝类N0系统及其在神经内分泌免疫调节网络中的作用机制研究Nitricoxide(NO)系统在脊椎动物的神经内分泌免疫调控网络中发挥着不可或缺的作用，它既能作为免疫系统的效应部分，直接参与入侵病原的清除，又能作为神经系统的重要类型，通过神经内分泌免疫调控网络内的相互作用来调节机体的免疫应答水平。目前发现，NO系统在无脊椎动物中同样发挥着重要的作用，能参与调节无脊椎动物的生长、发育、学习、记忆、行为及免疫等生理活动。但无脊

7、椎动物NO系统的组成特征，及其在神经内分泌免疫调控网络中的作用的相关研究还十分有限。本研究采取分子、细胞生物学等手段，初步查明了贝类NO系统的分子组成和基本特征，明确了贝类NO系统与神经内分泌系统的相互作用方式，进而确定了NO系统在神经内分泌系统调控下对扇贝免疫应答的调节作用。从栉孔扇贝中克隆获得了一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase，NOS)基因C烈OS。它的cDNA全长为5023bp，编码一条1486个氨基酸组成的多肽链。C烈OS含有PDZ、氧化型和还原型3个结构域，后两个结构域由CaM结合位点连接。通过基因

8、组序列的信息学分析，在太平洋牡蛎中仅发现一个NOS基因CgNOS。体外扩增CgNoSN末端、C末端及中间位置结构域的cDNA序列，均获得单一的扩增条带。除了卵母细胞和受精卵，CfNOSmRNA转录本在扇贝个体发育的各个阶段均能检测到，并在性腺、外套膜、肝胰腺、肾