bfgf在帕金森病模型中的神经保护作用及其机制研究

《bfgf在帕金森病模型中的神经保护作用及其机制研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、暨南大学博士学位论文题名（中英对照）：bFGF在帕金森病模型中的神经保护作用及其机制研究StudyontheneuroprotectionanditsmechanismofbasicfibroblastgrowthfactorinthemodelofParkinson'sdisease作者姓名：杨鹏辉指导教师姓名及学位、职称：黄亚东教授学科、专业名称：遗传学论文提交日期：论文答辩日期：答辩委员会主席：论文评阅人：学位授予单位和日期：暨南大学博士学位论文摘要目的：研究碱性成纤维细胞生长因子（basicfibroblastgrowthfactor,bFGF）在6

2、-羟基多巴胺（6-hydroxydopamine,6-OHDA）诱导的帕金森（Parkinson’sdisease,PD）模型中的作用，并探讨其作用机制。同时对bFGF的药代动力学和安全性进行评价，为帕金森的临床治疗提供理论依据，也为bFGF提供安全有效的给药途径。方法：(1)利用脑立体定位系统将6-OHDA注射到SD大鼠纹状体进行造模，同时采用脂质体载药系统和经鼻给药的方式将bFGF递送入脑。(2)行为学（旋转实验，步态分析实验和旷场实验）检测bFGF和脂质体bFGF对6-OHDA诱导的PD模型的作用。(3)电化学高校液相色谱法（HPLC-ECD）检测大鼠

3、纹状体内神经递质DA及其代谢产物DOPAC和HVA浓度。(4)免疫组化法和免疫印迹法检测纹状体和黑质内TH的表达。(5)尼氏染色法观察尼氏小体。(6)核磁共振扫描成像分析大鼠受损侧纹状体感兴趣区FA,ADC,MD,T2,R2,CBF,MK,KR和KA值。(7)免疫印迹法检测大鼠受损侧黑质内PD相关蛋白的表达。(8)ELISA法测定大鼠血清中bFGF浓度。(9)ELISA法和免疫印迹法共同检测大鼠嗅球，大脑皮质，纹状体，海马和黑质内bFGF浓度。(10)HE染色观察大鼠嗅球，鼻黏膜，黑质，纹状体，肝脏和肺的病理学变化。(11)MTT法测不同浓度的6-OHDA和

4、bFGF对细胞活存活率的影响。(12)扫描电镜观察6-OHDA和bFGF处理后的细胞形态。(13)免疫印迹法检测PD相关蛋白的表达。I暨南大学博士学位论文结果：(1)脂质体bFGF鼻腔给药后30min能够分布于大鼠嗅球，大脑皮质，纹状体和黑质（p<0.05）；bFGF鼻腔给药后30min分布于大鼠嗅球，大脑皮质和纹状体内（p<0.05）；两给药组相比，脂质体bFGF鼻腔给药后在大脑皮质和纹状体内的含量明显多于bFGF单独给药组（p<0.05）。ELISA结果与western结果基本一致。(2)6-OHDA损伤4周后，大鼠旋转圈数达到6r/min，被视为成功模

5、型。(3)6-OHDA注射后造成动物行为障碍，包括：旋转圈数增加，步态紊乱，步幅减小，活动减少，活动频率降低等（p<0.05）。脂质体bFGF鼻腔给药后能够显著减少阿扑吗啡（Apomorphine,APO）诱导的旋转圈数，增加旷场中的运动距离，运动频率，延长了步幅，减少了通过时间等（p<0.05），这些行为学的改善作用效果明显强于bFGF给药组；而空载脂质体组对PD大鼠的行为学并无影响。(4)6-OHDA很大程度上减少了纹状体内DA，DOPAC和HVA的浓度（91.2%，84.3%，92.3%）（p<0.05）；与模型组相比，脂质体bFGF对DA的增加具有剂

6、量依赖性（11%，15.4%，25.9%），脂质体bFGF对HVA和DOPAC的上调作用与DA基本一致。bFGF给药组也增加了DA和DOPAC的浓度，但对HVA的浓度几乎没有影响。(5)TH阳性神经元在受损侧纹状体和黑质内的表达量仅为18%和22%（p<0.05），极大程度上损伤了神经元。与模型组相比，150μg/kg和300μg/kg两个剂量的脂质体bFGF给药后，TH阳性神经元的含量在纹状体内分别被提高了15%和23%（p<0.05），而在黑质内分别上调了20%和25%（p<0.05）。600μg/kg的脂质体bFGF和300μg/kg的bFGF在黑质纹

7、状体内对神经元的上调作用并不明显。相同剂量条件下，脂质体bFGF对神经元的促进作用要明显高于bFGF溶液组。免疫印迹结果与免疫组化结果基本保持一致。(6)6-OHDA在纹状体内使尼氏小体的数目减少了约80%（p<0.05），脂质体bFGF低、中两个剂量组显著增加了尼氏小体数目（p<0.05），组间相比，中剂量组的这种效果最为明显；与模型组相比，bFGF对尼氏小体的数目基本没有增加。II暨南大学博士学位论文(7)受损侧纹状体感兴趣区的FA值明显上调（p<0.05），而MD值却被下调（p<0.05），ADC在6-OHDA诱导的PD大鼠模型中并无显著改变；空白组双

8、侧FA、MD和ADC之间无差异；脂质体bFGF和bF