细小病毒H1诱导胃癌细胞死亡的分子机制研究

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1、上海第二医科大学博士后学位论文细小病毒H-1诱导胃癌细胞死亡的分子机制研究姓名：刘炯申请学位级别：博士后专业：内科学（消化系病）指导教师：萧树东20020601上海第二医科大学博士后研究工作报告前沿热点。已广泛地用于基因功能研究、药物筛选、疾病诊断、突变体与多态性研究、DNA测序等诸多方面。基因表达谱芯片是目前应用得最广泛的基因芯片，它能对来源于不同个体、不同组织、不同细胞周期、不同发育阶段、不同分化阶段、不同生理病理状态、不同刺激(包括不同诱导、不同治疗手段)条件下的组织细胞内基因表达情况进行对比分析。从而对基因群在个体特异性、组织特异性、发育特异性、分化特异性、疾病特异性、

2、刺激特异性等的变化特征和规律进行描述，进一步阐明基因的相互协同、抑制、互为因果等关系。为了从分子水平了解细小病毒H—l抗肿瘤作用的机制以及寻找适合细小病毒H一1载体的、能高效杀灭胃癌细胞的基因治疗靶分子。本课题计划从了解不同人胃癌细胞株的细胞分子生物学特征与对细小病毒H-1敏感性差异的关系入手，进一步采用基因芯片技术等手段，较全面地了解H-1病毒诱导杀伤胃癌细胞死亡过程中基因表达的变化特征和规律，并对发现的可能线索进行深入的研究。将有可能为提高细小病毒抗肿瘤作用的研究提供帮助。上海第二医科大学博士后研究工作报告第一部分不同胃癌细胞株细胞对细小病毒H．1的敏感性差异及机制的探讨摘

3、要目的：细小病毒H一1是一具有选择性抑制转化细胞和肿瘤细胞生长的无囊膜微小病毒，对不同肿瘤细胞的细胞毒作用存在明显差异。本文旨在探讨不同胃癌细胞株对细小病毒细胞毒作用的敏感性差异及可能的机制，为进一步将细小病毒用于防治恶性肿瘤的生物治疗研究奠定基础。方法：HGC27(未分化)、BGC823(未分化)、MKN45(低分化)、SGC7901(中分化)、AGS(低分化)和MKN28(高分化)等6株不同分化状态胃癌细胞株的体外培养及传代，流式细胞术方法分析6株不同胃癌细胞的细胞增殖周期，RT-PCR技术了解不同胃癌细胞株中部分分化相关癌基因及抑癌基因的表达；制备并鉴定H．1病毒，H-1

4、病毒分别感染不同来源的胃癌细胞株，采用MTT方法检测不同胃癌细胞株对H-1病毒细胞毒作用的敏感性差异，RT-PCR、Westernblot技术观察H-1病毒中的非结构蛋白基因(NS。1)在6株不同胃癌细胞中的表达。结果：HGC27、BGC823、MKN45、SGC7901、AGS和MKN28等不同分化状态细胞株中，s期细胞的比率分别为：32．3％，28．7％，21．3％，28．2％，27．3％，15．9％；其中，HGC27、SGC7901细胞对H。1病毒的细胞毒作用敏感，而MKN45、MKN28、BGC823、AGS细胞对H．1上海第二医科大学博士后研究：[作报告病毒的细胞毒作

5、用相对耐受。H一1病毒中NS一1的mRNA及蛋白在HGC27、BGC823、MKN45和SGC7901等细胞中的复制及表达水平很高，而在AGS和MKN28中的复制及表达水平却很低。PCNA、p53、p27在MKN28细胞中的表达呈阴性，在其他细胞中的表达均呈阳性，p16在所有细胞中的表达均呈阳性，p21在BGC823、MKN45和AGS细胞中的表达呈阳性，在HGC27、SGC7901和MKN28细胞中的表达呈阴性。我们的结果显示：在胃癌细胞中，H一1病毒的细胞毒作用与胃癌细胞中的s期细胞的比率尚无明显关联。但可能与H．1病毒在细胞中的复制、表达及胃癌细胞中的PCNA、p53、p

6、27、p16等部分分化相关癌基因及抑癌基因的表达和p21抑癌基因的表达缺失相关。结论：H．1病毒的细胞毒作用在不同的胃癌细胞株中差异显著，其细胞毒作用与胃癌细胞病理学的分化程度、与反映增殖状态的S期细胞比率的关系尚不确切。但胃癌细胞中某些分化相关癌基因及抑癌基因的表达或缺失以及H-1病毒在细胞中的复制、表达可能与胃癌细胞对H一1病毒的敏感性相关。【关键词】胃癌细胞株细小病毒H-1癌基因抑癌基因机制ThesensitivityofdifferentgastriccarcinomacellonthecytotoxieityofparvovirusH-1【Abstract】Objec

7、tive：ParvovirusH-lisatypeofminuteviruswithnocapsulemembranewhichCarlselectivelyinhibitcelltransformationandneoplasticgrowth．Itscytotoxicityondifferenttumorcellisapparentlydifference．Thisarticleintendedtostudythesensitivityofdifferentgastriccarcinom