大鼠坐骨神经损伤后背神经节microRNA的表达变化及其功能的初步研究

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1、硕士学位论文密级大鼠坐骨神经损伤后背根神经节microRNA的表达变化及其功能的初步研究TheexpressionproflileofmicroRNAindorsalrootgan91ionaRersciaticnerveinju巧andprelimina巧probeintotheir如nction作者姓名：郑素娟学科专业：基础医学(人体解剖与组织胚胎学)学院(系、所)：基础医学院(人体解剖与神经生物学系)指导教师：蔡维君教授论文答辩日期兰竺!三二：’夕答辩委员会主中南大学2012年11月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成

2、果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：日期：趁』垒年旦月卫日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通

3、过网络向社会公众提供信息服务。作者签名糊新签名塑吼迎年出卓摘要目的研究大鼠坐骨神经损伤后背根神经节(Dorsalrootganglion，DRG)micro砌呵A(miRNA)的表达变化及其功能。方法选用健康成年雄性60．90日龄Spragu．Dawley(SD)大鼠，建立右侧坐骨神经切断损伤模型，3天后分别提取损伤侧和正常侧(对照)与坐骨神经相连的腰4．5(L4．5)DIⅪ的总砌悄，运用miRNA芯片技术筛选损伤后表达量出现差异的mi砌蛆；进一步采用实时定量PCR(Quan廿tativereal—timepolymeraseCh血reaction，qImPCR)和原位

4、杂交方法对芯片差异表达miRNA进行验证。运用生物信息学软件，根据芯片及qImPCR结果对筛选的mi砌蚣进行靶基因预测；根据预测结果，构建表达载体运用荧光素酶报告基因系统对候选mi对蛆的靶基因进行确认。最后，在培养的大鼠DRG感觉神经元，转染筛选获得的目的miRNA，运用B．tubulinⅡI免疫荧光组织化学染色观察其对神经元神经突长度的影响、W．estemblotting观察其对Rob02蛋白表达的影响研究其功能。结果删A芯片结果显示坐骨神经切断后，DRG内有21种mi对蛆的表达出现下调。qRT-PCI汲原位杂交结果均显示miR-144、miR-145和miR-214

5、的表达均下调，与芯片结果一致。生物信息学预测显示JRD6以和s，G弛PJ的3’．非翻译区(3’-Ⅷ缸．趾slatedre西ons，3’．UTR)存在m诹．144、m诹．145和m承．214的结合位点，荧光素酶报告基因系统结果显示miR-145和m擗214能分别抑制助602和s脚J的表达。Wrestemblot血g结果显示培养的DRG感觉神经元经转染m诹．145后，Rob02的蛋白表达明显下调，确认其是miR-145的靶基因，并且神经突长度缩短，证实m承．145调控DRG感觉神经元的神经突生长。结论坐骨神经损伤后DRG神经元mi砌忪发生差异表达。其中，miR-145和m诹

6、．214表达明显下调，m很．145抑制神经突的生长，其机制可能通过下调Rob02表达；miR-214可能调控srGAPl的表达。miRNA可能调控Slit．Robo．s雨AP通路分子参与周围神经再生过程。关键词micro砌蛆，大鼠，坐骨神经损伤，背根神经节ABSTRACTObjectiVeTIostudytheexpressionprofileofmicroI心正A(m源NA)indorsalrootg趾glion(DRG)世ersciaticnerve蜘u眄锄dprobe血omeirfIunc廿on．MethodsAdulthealthymaleSpragu-Dawl

7、ey(SD)rats，晤ng丘om60to90days，wereused．Therightsciaticnenrewas仃ansectedandtheanimalssuⅣivedfor仕盯eedays，thentheright(injlIred)andleft(na¨ve)L4．5DRGwerec01lectedforex仃ac血gtotalI心队．ThemiRNAmicroarrayanalysiswasp确medtoscreen也emfIf．ere而a1expressionofmiRNAs．Qu锄廿t撕Ver踟-timepolymer