khsrp在坐骨神经损伤后的表达及功能研究

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1、SOOCHOWUNIVERSITY博士专业学位论文论文题目KHSRP在坐骨神经损伤后的表达及功能研究研究生姓名____________________朱小建指导教师姓名____________________杨惠林专业名称____________________骨科研究方向__________________脊柱外科论文提交日期2015年3月苏州大学学位论文独创性声明本人郑重声明：所提交的学位论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不含其他个人或集体己经发表或撰写过的研究成果，也不含为获得苏州大学或

2、其它教育机构的学位证书而使用过的材料。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人承担本声明的法律责任。j-论文作者签名:曰期:苏州大学学位论文使用授权声明本人完全了解苏州大学关于收集、保存和使用学位论文的规定，即：学位论文著作权归属苏州大学。本学位论文电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。苏州大学有权向国家图书馆、中国社科院文献信息情报中心、中国科学技术信息研究所（含万方数据电子出版社)、中国学术期刊（光盘版）电子杂志社送交本学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存和汇编学位论

3、文，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索。涉密论文口本学位论文属在_____年__月解密后适用本规定。非涉密论文.if3.1^导师签名:期论文作者签名:_日期：加-小士KHSRP在坐骨神经损伤后的表达及功能研究中文摘要KHSRP在坐骨神经损伤后的表达及功能研究中文摘要目的研究KHSRP在坐骨神经损伤后的表达情况，探究KHSRP与施万细胞分化和神经元轴突再生的关系，分析KHSRP与β-catenin的相互调节关系及两者在施万细胞分化和神经元轴突再生过程中的作用，进一步揭示KHSRP在周围神经损伤后的再生机制。方法1.为了研究KHSRP

4、在损伤后坐骨神经中的表达，本研究通过构建大鼠坐骨神经夹伤模型，利用westernblot，免疫组织化学技术检测了KHSRP在正常组织及损伤组织中的表达；采用免疫荧光方法检测了KHSRP的细胞定位情况，分析其与施万细胞分化和神经元轴突再生的关系2.为了研究KHSRP在施万细胞分化过程中的作用，本研究通过构建原代施万细胞体外分化模型，westernblot及RT-PCR技术检测KHSRP、β-catenin及相关蛋白在此过程中的表达情况；通过核浆分离检测KHSRP的胞浆转移情况；通过构建KHSRP小干扰RNA及β-catenin过表达质粒并结合免疫细胞

5、荧光技术检测KHSRP是否通过调节β-catenin的稳定性从而介导施万细胞的分化。3.为了研究KHSRP在神经元突起生长过程中的作用，采用100ng/mlNGF刺激未分化的PC12细胞，模拟神经元体外分化过程，以及构建原代DRG神经元体外发育模型，检测KHSRP在神经元延伸过程中的表达、胞浆转运及对神经元突起延伸的影响。4.原代施万细胞和神经元的共培养，模拟坐骨神经损伤后施万细胞的再成髓鞘化过程，检测KHSRP、β-catenin的表达及KHSRP的胞浆运输对β-catenin稳定性的影响。结果1.westernblot及免疫组化分析显示，KHS

6、RP在坐骨神经损伤后表达升高，在第I中文摘要KHSRP在坐骨神经损伤后的表达及功能研究5天达到最高，随后逐渐回复。免疫荧光结果显示KHSRP在NF200、S100及Oct-6阳性的细胞中均有表达，提示KHSRP可能在施万细胞分化和神经元轴突再生过程中发挥作用。2.在cAMP诱导的施万细胞分化过程中，KHSRP的表达升高，而β-catenin的表达降低。核浆分离结果显示KHSRP在分化过程中胞浆蛋白水平增加，相应此时β-catenin的胞浆蛋白水平降低，提示KHSRP可能通过调节β-catenin的稳定性来介导施万细胞的分化。KHSRP的小干扰RNA

7、转染施万细胞后抑制了施万细胞分化的形态发生，该效应与过表达β-catenin的施万细胞形态相似。3.NGF刺激PC12细胞分化和体外培养的原代DRG神经元发育的过程中，KHSRP的蛋白及mRNA水平的表达均升高，而β-catenin成相反趋势。此外也相应观察到KHSRP的胞浆聚集及β-catenin的胞浆稳定性降低现象。KHSRP的小干扰RNA转染的PC12或DRG神经元突起延伸也受到影响。4.施万细胞和DRG神经元共培养过程中，KHSRP在1d表达最低，随后随着施万细胞髓鞘化，表达逐渐增高，β-catenin的表达呈相反趋势。核浆分离也显示出KH

8、SRP的胞浆转移及β-catenin的稳定性衰退现象。结论1.KHSRP在坐骨神经损伤后参与施万细胞分化和神经元轴突再生过