mirnas在变性真皮及热损伤成纤维细胞huvecs中表达及功能的研究

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1、中图分类号UDCR461O博士学位论文学校代码!Q三三三密级公开miRNAs在变性真皮及热损伤成纤维细胞／HUVECs中表达及功能的研究ThloressionandfunctionsifmiRNAs‘denaturedIIeexresslonantllunCtionsom1SinenatUre刚dermisandthermaldamagedfibroblasts／HUVECs作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：吕春柳临床医学外科学湘雅医院黄晓元教授论文答辩日期型丝垒塑拍弓答辩委员会中南大学二二。一三年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导

2、师指导下．进行的研究r作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方’外，论文中刁<包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我JLml：作的同志对本研究所作的贡献均已在沦义中作了明确的说明。作者签名：刚辋：竺生年jj』口学位论文版权使用授权书本人了解I}1南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校行权f宋留学位i仑文并根据幽家或湖南省有关部门规定送交学位}八文，允许。学位论文被务阅和借阅；学校町以公布学位论文的全部或部分内容，r，j‘以采川复印、缩印或其它手段保存学位论文。同H寸授权中国科J

3、’j--．J支术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，』i：通过f嘲络向社会公众提供信息服务。作者签名蝴签班u期丝年血m博士学位论文中文摘要目的miRNAs在变性真皮及热损伤成纤维细胞／HUVECs中表达及功能的研究摘要采用基因芯片的方法筛选烧伤患者变性真皮较正常皮肤中差异表达的miRNAs，然后预测其靶基因以及对变性真皮可能起保护作用的信号通路；挑选出在细胞增殖和迁移中发挥重要作用的miR-199a-5p及miR-126，检测其在大鼠变性真皮中的表达规律；深入研究miR-199a．5p在热损伤成纤维细胞、miR．126在热损伤人脐静脉血管内皮细胞(m

4、MCs)转归中的作用，并探讨其可能的机制。方法1．收集深二度烧伤患者的变性真皮及配对正常皮肤，标本收集时间均为患者烧伤后第四天，采用高通量miRNA芯片技术初步筛选出变性真皮较正常皮肤差异表达的miRNAs。在另一组标本中应用QRT-PCR技术检测部分差异表达的miRNAs，验证芯片结果的准确性。使用生物信息学方法预测其靶基因以及对变性真皮可能起保护作用的信号通路。筛选出与芯片结果一致并且在细胞增殖和迁移中发挥重要作用的miRNAs(miR-199a．5p和miR-126)进行下一步实验。2．建立大鼠深二度烫伤模型，检测miR-199a-5p和miR-126在大鼠变性真

5、皮恢复不同时间(烫伤后1天、3天、5天、7天、14天)．的表达情况，以大鼠正常皮肤做为对照。3．建立成纤维细胞热损伤模型(520，30s)，应用QRT-PCR技术检测miR-199a-5p在成纤维细胞热损伤后恢复不同时间(损伤2h、24h、48h)的表达情况，以正常成纤维细胞做为对照。成纤维细胞转染miR-199a．5p模拟物和抑制物后进行热损伤预处理，采用MTT法、细胞划痕试验及Transwell实验检测miR-199a-5p对热损伤成纤维细胞增殖迁移能力的影响。4．建立HUVECs热损伤模型(520，30s)，应用QRT-PCR技术检测miR-126在HUVECs热

6、损伤后恢复不同时间(损伤2h、12h、24h)的表达情况，以正常HUVECs做为对照。HUVECs转染miR-126模拟物和抑制物后进行热损伤预处理，采用MTT法、细胞划痕试验及博士学位论文中文摘要Transwell实验检测miR-126对热损伤HUVECs增殖迁移能力的影响。睦蟹：日木1．经miRNA芯片检测发现，烧伤患者的变性真皮相对正常皮肤差异表达的miRNAs有66个，其中34个显著下调，32个显著上调，上调比较明显的有miR-223、miR-320c，下调比较明显的是miR-203、miR-126、miR-199a-5p。通过生物信息学方法对差异表达的miRN

7、As进行预测，发现16个与创面修复密切相关的信号通路(如Apoptosis、Calciumsignalingpathway、Celladhesionmolecules、Cellcycle)，它们可能在变性真皮转归中发挥重要作用。2．动物实验结果显示：miR-199a-5p在大鼠变性真皮中早期呈低表达，3天降低最明显，之后不断升高，于第7天基本恢复正常；miR-126在大鼠变性真皮中也明显低表达，但于第5天基本恢复正常，之后继续升高，第14天增高为正常皮肤的5倍。3．成纤维细胞热热损伤后24小时miR-199a-5p的表达量降低为正常成纤维