mirnas在慢性痛风患者血浆中的表达及穿虎通痹合剂对差异性mirnas表达的干预作用研究

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1、分类号：R765.21密级：不保密UDC：610学校代码：11065博士专业学位论文miRNAs在慢性痛风患者血浆中的表达及穿虎通痹合剂对差异性miRNAs表达的干预作用研究王瑶指导教师王颜刚教授学科专业名称内科学（内分泌与代谢病）论文提交日期2015.10.19论文答辩日期2015.11.20答辩委员会主席赵家军教授miRNAs在慢性痛风患者血浆中的表达及穿虎通痹合剂对差异性miRNAs表达的干预作用研究中文摘要目的：应用microRNA基因芯片技术检测慢性痛风性关节炎患者血浆中微小RNA（microRNAs，miR

2、NAs）的表达谱系，筛选其与正常人血浆中差异性表达的miRNAs，应用荧光定量PCR（RT-qPCR）技术对部分差异性表达的miRNAs进行验证分析。同时研究穿虎通痹合剂治疗慢性痛风性关节炎的临床疗效和对差异性miRNAs表达的干预作用，探讨miRNAs在慢性痛风中的作用机制，研究穿虎通痹合剂治疗慢性痛风的作用新靶点，为中医药防治慢性痛风提供新的临床和分子学依据。方法：1、采集4例慢性痛风性关节炎和4例健康对照者的空腹血血浆，采用Trizol法提TM取RNA，运用exqion的LNAmiRNAsmicroarray高通

3、量检测筛选miRNAs的表达谱系，运用聚类分析软件分析差异性表达的miRNAs。2、扩大慢性痛风性关节炎患者样本量至60例，扩大健康对照组的样本量至30例，采用RT-qPCR方法对部分差异性表达的miRNAs进行验证分析。3、采用随机、双盲、双模拟、平行对照研究的方法，将195例慢性性痛风性关节炎患者按随机数字表法分为穿虎通痹合剂组、别嘌醇组和对照组，采集患者治疗前、治疗后4周及8周的血浆，运用RT-qPCR方法检测部分差异性miRNAs，采用酶联免疫吸附法测定趋化因子2（CCL2）和趋化因子8（CXCL8）水平，分析

4、穿虎通痹合剂对差异性表达miRNAs和趋化因子CCL2、CXCL8的干预作用。结果：1、慢性痛风性关节炎患者血浆中有48个miRNAs呈差异性表达，其中表达明显上调较对照组≥1.5倍的有36个，分别为miR-502-5p、miR-4748、miR-4726-5p、miR-10a-3p、miR-302a-3p、miR-4251、miR-5580-5p、miR-639、miR-4764-5p、miR-631、miR-4531、miR-1284、miR-H8-5p、miR-198；、miR-4466、miR-874-3p、m

5、iR-5190、miR-205-3p、miR-204-5p、miR-183-3p、miR-H1、miR-1471、miR-660-3p、miR-92a-2-5p、miR-1255a、miR-505-5p、miR-765、miR-4780、miR-4324、miR-4738-3p、miR-4800-5p、miR-B1-5p、miR-4455、miR-5004-3p、miR-4632-3p、miR-4634；表达下调较对照组≤1.5倍的有12个，包括miR-548l、miR-361-5p、miR-326、miR-151a-

6、3p、miR-486-5p、miR-769-5p、miR-130b-3p、miR-423-3p、miR-4288、miR-4732-5p、miR-584-5p、miR-339-5p。2、进一步行RT-qPCR验证分析显示，慢性痛风性关节炎患者血浆中miR-339-5p、miR-486-5p和miR-361-5p表达水平明显低于健康对照组，差异均有统计学意义（p<0.05），与miRNAs基因芯片结果相一致。3、临床试验结果显示，穿虎通痹合剂组、别嘌醇组和对照组患者的基线指标无显著差异（p>0.05）。三组治疗4周后的差

7、值比较，穿虎通痹合剂和别嘌醇组在上调血浆miR-486-5p和miR-361-5p和降低血浆CCL2水平方面优于对照组；穿虎通痹合剂在上调血浆miR-339-5p水平及降低血浆CCL8水平方面优于别嘌醇组和对照组。三组治疗8周后的差值比较，穿虎通痹合剂和别嘌醇组较对照组能更好的上调血浆miR-486-5p和miR-361-5p水平，穿虎通痹合剂较别嘌醇组和对照组能更好的上调血浆miR-339-5p和降低血尿酸水平。意向性分析显示，穿虎通痹合剂和别嘌醇组较对照组能明显降低慢性痛风性关节炎的急性发作率，而穿虎通痹合剂较别嘌

8、醇副作用更少。4、慢性痛风性关节炎患者的血浆miR-486-5p及miR-361-5p水平与其疼痛评分和C反应蛋白（CRP）等呈显著负相关。结论：1、慢性痛风性关节炎血浆中miR-502-5p、miR-4748等36个miRNAs表达上调，miR-339-5p、miR-486-5p、miR-361-5p等12个miRNAs表达下调