大鼠坐骨神经非冻结性冷损伤后背根神经节细胞凋亡的研究

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1、学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者虢汹龃魄Ⅵ莎年厂叫日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编

2、以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密区玉在——_L一年解密后适用本授权书。本论文属于不保密口。(请在以上方框内打“√”)娅册删一迫鬯一＼参一2反一鲨天津医科大学硕士学位论文月IJ吾研究现状、成果温度对周围神经的损害早已为人所知，但迄今为止，对其具体机制的了解还很不充分【l训，治疗效果也远差人意。低温造成的寒冷损伤，早在拿破仑东征的战争时代就为人所知，并由此受到医学界重视。在和平年代，寒区冬季作业和从事高山探险、极地考察的人群中，仍经常有寒冷损伤发生。周围神经

3、比较表浅，对异常温度的损害又十分敏感，所以在和平年代，神经冷损伤仍很多见，如0"-'5℃(如冰袋冷敷)15min就可能造成损伤，感觉和运动障碍甚至可持续6个月之久【5】。有如面神经炎、腰骶神经根病、坐骨神经痛等的发病，都与受凉有关，或受凉时加重。所以研究周围神经冷损伤有现实意义。低温对周围神经的损害，分为冻结与非冻结(non．freezingcoldinjury，NFCI)两种，发生机制尚无定论，国内外这方面的研究甚少。早期的研究认为组织的冻伤主要是由于缺氧缺血和不恰当的复温造成的再灌注损伤所致：

4、当机体受到寒冷刺激时，血液循环系统最早、最强烈发生反应，血管收缩，血容量减少，血液粘稠度增加，造成组织发生缺血、缺氧，生命活动受到抑制和破坏，机体最终表现为不同程度的冷损伤。但大量的临床及实验研究证实：第一，冷损伤后组织病理损害的高峰往往不在损伤的急性期，具有迟发性的特点。第二，周围神经的代谢较低，以及有多级血管供血，较之中枢神经，对缺血的耐受性较高。第三，以往周围神经冷损伤的研究，多是采用液氮等冻结性低温，这与临床造成神经冷损伤的实际条件相差甚远。这其中的机制不明。Jia【3】研究了非冻结性低温

5、对大鼠坐骨神经的影响，发现同样的5℃低温2小时作用下，间断受冷组A和C纤维的复合动作电位波幅均明显低于持续受冷组，6天后仍有明显差异；与此电生理改变相平行的病理变化是，间断受冷组的毛细血管内红细胞聚集和血小板栓子形成，神经纤维变性、内膜水肿、局部神经血流以及血管内皮损害也更重。因此Jia通过病理组织学、微循环和电生理等方面研究在1998年提出，非冻结低温对神经损害的机制是多途径多因素的，缺血不是唯一的原因，温度波动可能加重冷损伤，其它因素还可能有温度对神经的直接损伤、血管源性或细胞源性水肿、轴浆运

6、输障碍掣¨】。天津医科大学硕士学位论文研究目的、方法本研究基于这一假说，通过观察大鼠坐骨神经对应的L4一L6DRG}O经元在非冻结性低温作用后的凋亡情况，探讨周围神经冷损伤后DRG的损伤情况以及可能成因。初级感觉神经元胞体存在于DRG中，属假单极神经元，其周围突受损后，可以产生疼痛、炎性反应，并有一定程度的再生；其中枢突延伸到脊髓后角，受损后却缺乏再生的能力。既往研究发现坐骨神经损伤【6】(离断【71、结扎f羽、钳夹等)之后DRG发生死亡。感觉神经元的死亡形式主要以凋亡为主，但是有关死亡率报道不一

7、【吼10】，也未见明确报道凋亡率，而周围神经冷损伤后DRG的凋亡是周围神经修复的重要环节。因此，研究周围神经冷损伤后DRG的凋亡有利于阐明：①周围神经冷损伤后DRG损伤情况及具体进程究竟如何?坏死率与凋亡率分别为多少?②与其它类型损伤相比，冷损伤有无特异性?③周围神经再生、修复与凋亡是什么关系?能否对中枢神经损伤后的神经元修复提供治疗线索?本研究旨在阐明这些问题。本研究利用非冻结性低温的动物模型，模拟类似临床周围神经冷损伤的过程，采用定性及定量不同地方法研究背根神经节神经元凋亡的规律。于低温结束后

8、l周、2周和3周采用流式细胞仪(Annexin／PI法)和TUNEL法定量和定性检测DRG神经元凋亡的情况。探讨周围神经非冻结性冷损伤后，DRG神经元凋亡及坏死的规律，以期为探讨整个周围神经冷损伤机制提供理论，并为临床治疗提供理论支持。2天津医科大学硕士学位论文对象和方法l对象1．1实验动物健康雄性3月龄Wistar大鼠，SPF级，利华实验动物技术有限公司(国家级)。1．2主要药品及试剂药品或试剂名称InSituCellDeathDetectionKit．POD(TUNELtech