大鼠提睾肌神经损伤后血管内皮细胞的凋亡

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1、大鼠提睾肌神经损伤后血管内皮细胞的凋亡　　Keyaster;endothelium，vascular;apoptosis　　Abstract:AIMTostudytheapoptosisofvascularendothe-lialcellasternerveoftherat.METHODSTheexpressionofBcl-2，Baxandp53inendothelialcellsasternerveeansofimmunohistochemicalSPmethod.RESULTSTheexpres-sionofBcl-2，Baxandp53inendothelialcel

2、lofinjuredcre-mastermerveincreasedobviously，andreachedthehightestlevelIberofpositivecellofBaxandp53asterNerveinjurycouldresultinapoptosisoftheendothelialcellsandmightplayanimportantroleinthedysfunctionofmicro-circulation.　　0引言　　血管内皮细胞具有复杂的生物学功能，其中包括促凝、抗凝、调节血管张力、影响血管生成、合成基质及调节和加重炎症等［1-3］.血管内

3、皮细胞的正常生理功能除因创伤、内毒素等，氧自由基及Ca2+超载等因素遭受损伤和影响外，血管内皮细胞凋亡则是已受到重视的影响其存活及一系列病理生理改变的重要因素之一［4-6］.有关研究显示，大鼠提睾肌血管内皮细胞有CGRP，NPY等肽类神经递质的分布，并认为对其生理功能有重要作用［7］.在血管创伤和手术修复中，有关神经常可遭受损伤，失去神经支配的血管内皮细胞是否出现过度凋亡，参与微循环障碍，目前尚未见报道.我们以大鼠提睾肌神经损伤微循环模型，对血管内皮细胞的Bal-2，Bax及p53表达情况进行研究，以探讨神经损伤后血管内皮细胞的凋亡及其对微循环的影响和作用.　　1材料和方法　

4、　1.1材料　　成年雄性SD大鼠35只，体质量（250±30）g，由本校实验动物中心标准饲养室提供.其中30只平均分为术后24，72h及1.切片经脱蜡和水化后，依次以氧化酶阻断剂和非免疫血清室温孵育10min，Bcl-2，Bax（140）和p53（1100）单克隆抗体室温孵育60min，生物素标记第二抗体和链霉菌抗生物素-过氧化酶（三抗）各室温孵育10min.最后以DAB呈色反应5～10min.自来水冲洗终止反应.除部分p53切片外，其余切片均以苏木精复染.切片脱水、透明及封片.对照组动物和实验组动物非手术侧提睾肌标本切片实验方法步骤同上.用PBS分别代替第一、二、三抗体做阴

5、性对照.　　结果判定及统计学分析:条状血管内皮细胞胞质出现棕黄色颗粒为Bcl-2及Bax阳性细胞，血管内皮细胞核出现棕黄色颗粒为p53阳性细胞.观察10个连续切片，选血管密集处中的5个400倍视野计数平均100个细胞中的阳性细胞作为调亡指数，以反映调亡程度.所得各组数据以x±s表示，采用χ2检验分析.2结果　　2.1Bcl┐2，Bax和p53在血管内皮细胞的表达　　Bcl-2，Bax和p53阳性细胞位于血管壁内表面的内皮细胞层，镜下可见Bcl-2和Bax阳性内皮细胞核两侧扁平窄条状细胞质内充满棕黄色颗粒，但在细胞膜内外侧也有同样的阳性颗粒（Fig1～3）.p53阳性细胞表现为

6、突入血管腔的棱形或椭圆形细胞核为棕黄色颗粒，但胞质也可见到（Fig4）.对照组动物仅能见到少量阳性细胞.阴性代替试验结果均为阴性.在实验组动物，Bcl-2，Bax和p53均有大量表达，在血管密集处，许多血管和毛细血管的内皮细胞几乎全为阳性.但出现阳性细胞的血管分布不均，常呈束状分布，在肌束间血管束和毛细血管阳性细胞十分密集，且着色很深.Bcl-2与Bax和p53的阳性细胞数量及表达强度比有所不同，在术后各个时间，Bax和p53的阳性表达明显大于Bcl-2（P<0.01，Tab1）.表1Bcl-2，Bax及p53在血管内皮细胞的表达（略）　　2.2神经损伤后不同时间的Bc

7、l┐2，Bax及p53表达　　Bcl-2，Bax及p53在神经损伤后的不同时间表达情况不同.神经损伤24h，阳性细胞已较明显，但是神经损伤后72h阳性细胞的数量可达非常显著，术后1matorymediatorsinthepathogenesisofsepsisandsepticshock［J］.EurJClinInverst，1991;21:559-573.　　［2］GrauGE，deMoerlooseD，BullaO，LouJ，LeiZ，ReberG，RicouB，MorelDR，SuterPM.Ha