β二甲基巯基丙酸内盐DMSP降解代谢相关功能新基因的克隆及初步鉴定

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1、学校名称：华中农业大学分类号：学号：2010304110022单位代码：10504密级：无华中农业大学硕士学位论文13．二甲基巯基丙酸内盐(DMSP)降解代谢相关功能新基因的克隆及初步鉴定CloningandFunctionalIdentificationofNewGenesInvolvedInDimethylsuifoniopropionaeDegradation研究生：学号：指导教师：指导小组：汪鹏2010304110022李友国教授陈大松副教授谢福莉讲师李一星讲师专业：微生物学研究方向：环境微生物学获得学位名

2、称：理学硕士获得学位时间：2013年6月华中农业大学生命科学技术学院二O一三年六月华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书学位论文否如需保密，解密时间年月日是否保密独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导；

3、!币指导下迸行的研究T-f睨t取得的研究成果．尽我所知，除了文中特_男{

4、加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他入已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，指导教师对此进行了审定．与我一同工作的问患对本研究所傲的任何贡献均已在论文中做了明确的说嬲，并表

5、示了谢意．研究生蔬孑矽彩帆秒多月，弘学位论文使用授权书本人完全了解华中农业大学关于保存、使用学位论文的规定，帮学生必须按照学校要求提交学位论文的印刷本和电予版本；学校有权保存提交论文的印劂版和电予舨，并提供目录检索和阅览服务，可以采用影句、缩印或扫描等复稠手彀保存，汇编学位论文．本人同意华中农业大学可以用不阿方式在不同媒体土发表、传播学位论文的金都或部分内容，为存在馆际合作关系的咒弟高校用户提供文献传递和交换服务，同时本人保留在其他媒体发表论文的权力．注：保密学位论文(印涉及i技术秘密、商业秘密或申请专．；香!

6、筹

7、潜在翳要提交保密妁论文)在解密后适用-t：本授权书．学位论文作者签名：主荔懈务导帮签名：绷签名日期：汐，之年么月f)甚签名日期勘f弓年￡月I靠垒：三里薹蕉薹亘壁囱垫!型塑!隆堡垡塑担羞功筐堑茎国丝壅隆壁垫垄鳖枣目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．IABSTRACT⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。II缩略表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯Ⅳ1前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

8、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．1DMSP的生物学功能⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。11．2DMSP代谢途径中的相关功能基因⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。21．2．1DMSP去甲基化降解途径及关键功能基因⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．41．2．2产DMS降解途径及关键功能基因⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．51．2．3DMSP分解代谢中的辅助功能基因⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯121．3研究目的和意义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．151．4技术路线⋯⋯⋯⋯⋯⋯

9、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．172材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯182．1实验材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．182．1．1菌株和质粒⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。182．1．2培养基⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯182．1．3主要仪器和试剂⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯192．2实验方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．202．2．1细菌基因组

10、DNA的提取⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯202．2．2基因组DNA的部分酶切及回收⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。212．2．3载体的制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。232．2．4DNA连接反应⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．242．2．5连接产物的包装⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．242．2．6包装产物的侵染⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。252．2．7文库的质量分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．25

11、2．2．8文库的保存⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．252．2．9文库的筛选⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯。262．2．10B22．1的抗生素抗性分折⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯262．2．11三亲本接合转移⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯272．2．12无DMSP代谢能力的突变株的筛选⋯⋯⋯