新的白血病相关基因LRP15的克隆及其功能的初步研究

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1、中国人民解放军军医进修学院硕士学位论文新的白血病相关基因LRP15的克隆及其功能的初步研究姓名：徐周敏申请学位级别：硕士专业：血液内科指导教师：于力;楼方定2003.6.1麟漱军总暇院军羼避谬学院硬士论史英文鳙略语焚文缩写CRRLGSEST姒e嚣pCR挂{GSSAG萎蠢GFPA灏LALLC燃LCLLRT-PeR獬S-Pe骁CdR彳SAK562嬲DSNPBN8鹾Np8S_c!葵文奎称CompleteRemissionRestrictionLandmarkGenomicScanningExpressionSequenceTagsRapidAm

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4、髓秀磐增生综合蔹正常外舆血正常蚤髓蠢常铃躜血于垂瓣绝竺苎羔璺堡些兰垦堂竺兰堕．一———————竺：兰坚耪砖白血病牺荧基因LRPl5的克隆及其功能的初步研究中文摘要急性白血病的发生包括了复杂的基因突变、缺失、癌基因激活及抑癌基因失活等多种分子斑物学水平的异常，寻找新的白赢病相关基因一点是这一领域的研究热点，不仅有助于阐明白赢病发生发展的机制，而且可能找到一些治疗犯位点。为克隆与白血病复发相荧的新基因(LRFl5)的全长cDNA序列，我们应用先选的分子生物学及生物信息学援拳对一段已知仅在白焱病复发标本中彼甲基化的1．8kb长的DNA片段进行研

5、究分析，通过在美国生物信息中心《NCBD捉供题bEST数据霹q-电子杂交秀霹相互露叠黩EST冀段缎装、设骨；；物进行cDNA末端快速扩增。以高通量熬因组序列(HTGS)数据库及SAGE交库为基菇，将获得砖cDNA矗段透行染色体定位及纽织表这分析。结慕克隆到了LRPl5基因的全长cDNA序列(1718bp)，含一个780bp的开放读码框架，编码259个氨基酸，定位于染色体3p24，在多种组织中表达。为避一步研究该隳因的功能奠定了基础。通过对新基因的生物信息学分析，表明LRPl5基因是一个与人类急性白焱病及其纯髀瘤发生，发筑密切魏是的基爨。为

6、透一步溺姨麓基翳LRPl5编码蛋白质的功能，确定编码蛋白质的亚细胞定位。我们利用生物信息学方法，以人类基嚣经资源(HGR)数据库为基硪，进行LRPl5启动子熬靖征分橱。在Prosite数据库中进行有生物学意义的保守性氨基酸修饰位点搜索。通过RPS．BLAST程序预测英簧白质鳃构及功能。以增强绿色焚光蛋白(EGFP)为报告基因，利用激光共聚焦显微镜等实验方法验证生物信息学的分析结果。结采表明，LRPl5编码蛋白舍有cAMP依赖的蛋白激酶磷酸化位点及酪蛋白激S鬃藏军总嚣藐军医遗掺擎貔硕士论又酶lI磷酸化位点，其N端有一个富含亮氧酸重复序州。L

7、RPt5编码蛋白定位于细胞核内。提示LRPl5是一个糖蛋白因子，其功能可能是参与细胞的生长分化，调节细胞属擞，细l龟的发-g调控或DNA修复。也从另一全侧面证实了生物信息擎预测基因功能的真实性。为透一步从实验上证实该基菠麓表这是否与盘矗病抟发生发葳相关，我们选择正常成人外周赢(NPB)、正常骨髓(NBM)、经G—CSF动员的正常外用血予钿跑(NPBSC)、原代蠹焱病细跑及自血痛细胞系为研究对象，采用R．T-PCR方法分别检测了LRPl5基因的表达水平；从研究白血病细胞系K562中LRpl5岩动子区CpG岛甲基化状况出发，应用甲簇化抑制荆5

8、．象氮一2’．脱氧胞嘧啶(5-aza．2'-deoxycytidine、decitabine、CdR)及去乙耽化酶抑制到曲古拇葚密(Trichostatin，TSA)诱导CpG岛去甲基化及组蛋