金花茶花色相关基因的克隆及其功能研究

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1、分类号722密级公开UDC学位论文金花茶花色相关基因的克隆及其功能研究CloningandfunctionresearchofpigmentgenesfromCamellianitidissima周兴文指导教师姓名李纪元研究员申请学位级别博士专业名称园林植物与观赏园艺研究方向山茶花分子育种论文提交日期2012年5月论文答辩日期2012年6月学位授予日期2012年7月答辩委员会主席评阅人北京·中国林业科学研究院万方数据学位论文金花茶花色相关基因的克隆及功能研究学位论文作者周兴文指导教师姓名李纪元研究员指导小组

2、成员罗达教授（中山大学）田敏副研究员申请学位级别博士专业名称园林植物与观赏园艺研究方向山茶花分子育种论文答辩日期2012年6月中国·北京万方数据DissertationfortheDegreeCloningandfunctionresearchofpigmentgenesfromCamellianitidissimaCandidate:ZHOUXingwenSupervisor:ProfessorLIJiyuanAssociateSupervisor:ProfessorLUODaAssociateprofe

3、ssorTIANMinAcademicDegreeAppliedfor:Ph.DOrnamentalplantsandSpeciality:HorticultureDateofDefence:2012-6-20Degree-Conferring-Institution:ChineseAcademyofForestry万方数据独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含

4、为获得本研究生培养单位或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解中国林业科学研究院有关保留、使用学位论文的规定，中国林业科学研究院有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权中国林业科学研究院可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。（保密的学位论文在解

5、密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签名：年月日年月日学位论文作者毕业联系方式工作单位：联系电话：电子邮件：通讯地址、邮编：万方数据摘要金花茶（Camellianitidissima）属于山茶属金花茶组，花色金黄，是我国珍稀濒危植物，亦是世界名贵的观赏植物之一，有“茶族皇后”之美誉，是培育黄色山茶花的珍稀遗传资源。尽管关于金花茶杂交育种的研究也屡见报导，但多年的杂交育种工作却很少获得像金花茶花色那么金黄的杂交后代。其原因可能在于研究者对其花色的遗传变异规律以及花色素合成的分子机理不甚了解，未能很好地利用

6、金花茶所特有的种质资源进行黄色山茶花的育种工作。因此，本研究对金花茶花色的形成变化规律以及若干关键基因的功能进行了初步探索，对开展黄色山茶花的分子育种具有重要的理论意义和应用价值。利用RT-PCR(Reversetranscriptionpolymerasechainreaction)方法和RACE（RapidAmplificationofcDNAEnds）技术从金花茶花瓣中分离出6个与类黄酮色素Quercetin（Qu）合成相关基因的cDNA全长，1个与类胡萝卜素新黄质合成相关基因的cDNA全长，分别命名

7、为金花茶查尔酮合成酶基因（CnCHS）、金花茶查尔酮异构酶基因（CnCHI）、金花茶黄烷酮3-羟化酶基因（CnF3H）、金花茶类黄酮3’-羟化酶基因（CnF3’H）、金花茶黄酮醇合成酶基因（CnFLS）、金花茶二氢黄酮醇还原酶基因（CnDFR）和金花茶新黄质合成酶基因（CnNSY）。对各基因的生物信息学分析表明，这些基因为所克隆的目的基因。将这些基因在Genbank中登录，其登录号码分别是：HQ269804，HQ269805，HQ290517，HQ290518，JF343560，JF440957，CnDFR

8、尚未登录。高效液相色谱（High-performanceLiquidChromatography，HPLC）分析与花瓣表皮细胞色素观察结果表明，在金花茶花瓣呈绿色时，花瓣中类黄酮成份槲皮素-7-O-β-D-葡萄糖苷（Quertecin-7-O-β-D-glucoside，Qu7G）、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷（Quertecin-3-O-β-D-glucoside，Qu3G）、槲皮素（Quercetin，Q