拟南芥氮素营养相关基因的图位克隆及其初步功能验证

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1、万方数据分类号：盘"I【1箩jUDC：锄5。：密级：单位代码：10798拟南芥氮素营养相关基因的图位克隆及其初步功能验证Map--basedCloningofArabidopsisNNutritionGenesandPreliminary量。UnctJonalVerlllcatlonn·●_f’∽■二级学科：作物遗传育种研究方向：分子遗传育种研究生：麻艳超指导教师：东方阳教授徐江研究员所在院所：生命科技学院2014年6月万方数据独创性声明lIIitlIIIIIIIIIIIIIIIIlY2762076本人声明所呈交的学位论文是

2、本人在导师指导下进行的研究工作和取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢之处外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得塑皇鱼越竖整堂瞳或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均己在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：季衣手互殛签字日期：晰年∥月J尸日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解塑苎垦趑堙整堂睦有关保留、使用学位论文的规定。特授权塑兰垦越堙堇堂睦可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段

3、保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘。(保密的学位论文在解密后适用本授权说明)学位论文作者签名徘憋签字日期．彻午年‘月垆万方数据缩略词英文缩写英文全称中文名称K旺’NRNiRGS／GOGATGSGOGATASCPSaseRFLPPCRRAPDDAFSSRSSLPISSRSTSSCARAminoAcidTransporterNitrateReductaseNitriteTeductaseGlutamineSynthetase／GlutamateSynthasePathwayGlutami

4、neSynthetaseGlutamateSynthaseAsparagineSynthetaseCarbamylPhosphataseRestrictionFragmentLengthPolymorphismPolymeraseChainReactionRandomAmplifiedPolymorphicDNAAmplifiedFingerprintsSimpleSequenceRepeatsSimpleSequenceLengthPolymorphismInter-simpleSequenceRepeatSequence

5、TaggedSiteSequenceSharacterizedAmplifiedRegion氨基酸转运体硝酸还原酶亚硝酸还原酶谷氨酰胺合成酶／谷氨酸合成酶途径谷氨酰胺合成酶谷氨酸合成酶天冬酰胺合成酶氨甲酰磷酸酶限制性长度多态性聚合酶链反应随机扩增多态性DNA分子标记DNA扩增指纹简单序列片段简单序列长度多态性简单序列重复间区序列标签位点序列特征化扩增区域cAPscleavedAmplifiedP。lYmorpllic酶切扩增多态性序列CS曰母训珂瑁多念1王t}予少USequenceDeftvedCleavedAmplifie

6、dPolymorphic衍生的酶切扩增多态性dcAPss．equence序列厂r岁USNPSingleNucleotidePolymorphism单核苷酸多态性AS—PCRAllele．SpecificPCR等位基因特异性PCR万方数据摘要氮素是植物生长发育所必需的矿质元素之一，同时是影响农作物产量的主要因素之一。随着氮素资源和环境问题日益严峻，利用转基因技术提高作物的氮素利用效率具有重要的理论和应用价值。本研究以由EMS诱变拟南芥C01．0生态型背景材料获得的两株耐低氮突变体Int3和Int5为材料，利用基因图位克隆的方法

7、，筛选到与拟南芥氮素营养相关的重要基因。利用Int3突变体材料成功克隆到TT8基因，在拟南芥中，m基因的表达产物为TT8蛋白，该蛋白属于碱性螺旋．环一螺旋(basic．helix—loop．helixdomain．bHLH)转录因子。在Int3突变体中，m基因外显子上的第760个碱基由C突变为T，导致编码氨基酸的密码子由CAA突变为终止密码子UAA，氨基酸翻译提前终止，基因发生无义突变；通过对Int5突变体氮素相关基因图位克隆，最终将目的基因定位于SSLP分子标记5-5654与5-5443两个分子标记之间，标记之间距离为21

8、lkb，跨越了MKPll、F2K13和F5E19共3个BAC重叠克隆群。本研究还开发了21对SSLP分子标记和两对CAPS分子标记，同时改进了根据SNP位点等位基因差异设计分子标记的方法，为基因检测和图位克隆提供更丰富的分子标记资源，节省研究时间，提高克隆效率。目前，丁髓基因研究表明该基因