拟南芥窄叶抗病突变体27.2基因的图位克隆与功能研究.pdf

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1、万方数据ShandongAgriculturalUniversityPh．D．DISSERTATIONMap—basedCloningandFunctionalAnalysisofanArabidopsisMutant27．2withNarrowLeafandDiseaseResistanceDepartment：PlantProtectionMajor：PlantPathologyPh．D．Candidate：WeiYangSupervisor：ProfessorXinhuaDing2014．06．07万方

2、数据关于学位论文原创性和使用授权的声明本人所呈交的学位论文，是在导师指导下，独立进行科学研究所取得的成果。对在论文研究期间给予指导、帮助和做出重要贡献的个人或集体，均在文中明确说明。本声明的法律责任由本人承担。本人完全了解山东农业大学有关保留和使用学位论文的规定，同意学校保留和按要求向国家有关部门或机构送交论文纸质本和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权山东农业大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文，同时授权中国科学技术信息研究所

3、将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并向社会公众提供信息服务。保密论文在解密后应遵守此规定。论文作者签名：苎堑熙导师签名：丁亲彳挚日期：№』乒4-／／万方数据符号说明缩写符号英文名中文名cDNAcomplementaryDNA互补DNAETETIGCGFPHPLCHRICSlJALRRMeJANahGNONPRlPCDPDFl．2PRPTIethyleneEffector-triggeredimmunity乙烯效应子触发的免疫反应gaschromatography气相色谱greenfluoresce

4、ntproteinlli曲performanceliquidchromatographyHypersensitiveresponseIsochorismatesynthase1JasmonicacidLeucine-richrepeatmethyljasmonateSalicylatehydroxylaseNitricoxide绿色荧光蛋白高效液相色谱超敏反应异分支酸合成酶1茉莉酸亮氨酸富集重复茉莉酸甲酯水杨酸羟化酶一氧化氮nonexpressorofpathogenesis-relatedgenes1病程相

5、关基因非表达子1Programmedcelldeath细胞程序化死亡plantdefensin植物防卫素PathogenesisrelatedproteinPAMP-triggeredimmunityRNA·SeqRNAsequencingROSSASADSARSNPSSRreactiveoxygenspeciessalicylicacid病程相关蛋白PAMP触发的免疫反应转录组测序活性氧水杨酸Stearoyl．acylcarrierproteindesaturase硬脂酰酰基载体蛋白去饱和酶Systemic

6、acquiredresistance系统获得性抗性singlenucleotidepolymorphism单核苷酸多态性Simplesequencerepeat简单序列重复万方数据目录摘要一⋯⋯⋯⋯一一⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一一ABSTRACT刖舌～IIIIl植物抗性机制研究进展1．1拟南芥抗病基因的克隆1．2植物抗病基因的结构1．3抗病基因的分类一．3⋯4⋯)一13—15—161．4植物抗病信号分子及其网络2SSl2基因研究现状3蛋白互作研究技术进展3．1酵母双杂交3．2双分子荧光互补⋯一3．3Pull．

7、down技术与免疫共沉淀4本研究的目的与意义．17第二章27．2突变体基因的图位克隆及功能鉴定1材料与方法17～19—191．1拟南芥材料及培养1．2菌株和载体1．3常用酶与生化试剂1．4常用仪器1．5溶液及培养基的配制1．6核酸操作及载体构建1．6．1DNA及RNA抽提．1920．．．．．．．．201．6．2RT-PCR和定量PCR分析1．6．3感受态细胞的制备1．6．4热激转化大肠杆菌(DH5a)20．．．．．．．．231．6．5电转化农杆菌感受态细胞(GV3101)1．6．6转化菌落的阳性鉴定2324万

8、方数据1．6．7质粒DNA的提取1．7拟南芥基因的克隆与转化⋯⋯⋯⋯一1．8病原菌ntDC3000接种和细菌生长分析1．9细胞学染色1．10拟南芥叶片脂肪酸测定2结果与分析⋯一⋯⋯⋯．．2．127．2突变体的鉴定2．227．2基因图位克隆2．327．2的表型介于野生型和T-DNA突变体之间2．427．2的去饱和酶活性降低2．5SSl2基因三个突变体的表达谱分析252627332．6qRT-PCR验证