hUCMSCshHGF基因修饰的hUCMSCs移植在心肌损伤修复中的实验研究

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1、分类号：R318．11密级：学位类别：科学学位口专业学位团图博士学位论文DOCTORALDISSERT枷ON学校代码：1062学号：2010701013学：科门类：医学又坪眚科矢号TIANJINIREDK：址U奠ⅣERSn阿论文题目：hUC-MSCs／hHGF基因修饰的hUC．MSCs移植在心肌损伤修复中的实验研究TITLEExperimentalStudyofhUC-MSCs／hHGFGeneticallyModifiedhUC—MSCsTransplantationOHRepairofMyoca

2、rdialInjury一级学科：临床医学二级学科：外科学胸心外科论文作者：张嵬指导教师：刘晓程教授天津医科大学研究生院二。一三年四月学位论文原创性声明lIIIIMlullIIIIIIIIIIIIIllMIIIIIIlY2396573本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作

3、者签名：刍篮羟I垒日期：沙f5年绢“}臼学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密口，在——年解密后适用本授权书。本论文属于不保密团。(请在相对应的方框内打“√”)学位论文作者导师签p／1Ⅷ心I／1●日期：山心年幼对日曜油脾蝴暂日天津医科大学博士学位论文中文摘要目的：本实验选用广

4、西巴马小型猪，通过外科手术建立急性心肌梗死模型，将体外培养的人脐带间充质干细胞(Humanumbilicalcordmesenchymalstemcells，hUC．MSCs)经心外膜植入心肌梗死区，观察hUC．MSCs移植对缺血性心肌损伤的修复作用并探讨其机制。同时比较人肝细胞生长因子(Humanhepatocytegrowthfactor，hHGF)基因修饰的hUC．MSCs移植与单纯的hUC．MSCs移植在同一急性心肌梗死模型中的心肌损伤修复作用有无差别并探讨其可能的机制。方法：无菌条件下采集

5、足月儿的脐带后，hUC．MSCs经体外分离、培养、扩增至第五代。用携带hHGF基因的重组腺病毒基因表达载体以150的感染强度转染hUC．MSCs，获得hHGF基因修饰的hUC．MSCs。两种干细胞均在术前以CM—Dil标记备用。采用外科手术方法于中、远端l／3交界处结扎冠状动脉前降支制成小型猪急性心肌梗死模型。随机将实验动物分为4组，每组6只。A组空白对照组(只造模而不做任何干预)；B组PBS组；C组hUC—MSCs移植组；D组hHGF基因修饰的hUC．MSCs移植组。C组与D组中每只动物分别接受总

6、计2×107的hUC．MSCs或hHGF基因修饰的hUC-1ⅥSCs，分成9．10个点经心外膜注入梗死后缺血的心肌；PBS组则注入同等体积的无菌PBS。6周后，采用静息核素心肌灌注显像与经胸超声心动图评价梗死区血流灌注与局部收缩功能的变化。实验动物处死后采集梗死区域的心肌标本，采用RT-PCR、免疫荧光与免疫组化、Masson和TUNEL染色的方法观察干细胞的植入、增殖及分化，血管新生，存活心肌、细胞凋亡的情况，以揭示可能的作用机制。结果：(1)术后6周与空白对照组和PBS组相比，hUC．MSCs移

7、植组与hI-IGF基因修饰的hUC．MSCs移植组经静息核素心肌灌注显像检测的灌注质量缺损百分率变化显著改善(尸

8、因修饰的hUC．MSCs移植组的vWF免疫组化染色结果显示新生血管密度显著增加(p<0．001)，Masson染色结果显示存活心肌明显增多而纤维组织明显减少(尸