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时间:2019-02-03
《hucmscs移植对围绝经期大鼠卵巢储备功能影响的实验研究》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、hUCMSCs移植对围绝经期大鼠卵巢储备功能影响的实验研究中文摘要【目的】1.探讨人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)移植对自然衰老围绝经期SD大鼠(以下简称围绝经期SD大鼠)卵巢储备功能的影响;2.探讨hUCMSCs移植对围绝经期SD大鼠卵巢组织形态学、细胞超微结构和细胞凋亡的影响;3.探讨hUCMSCs移植提高围绝经期SD大鼠卵巢储备功能的可能途径;4.探讨hUCMSCs移植到围绝经期SD大鼠体内的安全性及可行性。【方法】阴道脱落细胞涂片法监测动情周期变化,筛选出30只月龄13~15个月的SPF级围绝经期SD大鼠模型,随机分为
2、A、B、C组(每组10只),所有围绝经期SD大鼠生活条件及喂养方式相同。A组不予处理,B组经尾静脉移植浓度为l×106细胞/ml的hUCMSCs单细胞悬液lml,隔日1次,共2次;C组与B组相同方法和实验时间移植细胞缓冲液(以下简称PBS液)lml。于成模时,实验时间7d和14d时(即B组和C组末次移植后7d和14d时)检测各组围绝经期SD大鼠激素:E2、P、LH、FSH的水平,INHB、AMH水平,观察实验时间7d、14d时各组围绝经期SD大鼠卵巢组织形态学、细胞超微结构的变化和细胞凋亡情况。【结果】1.SD大鼠阴道脱落细胞的变
3、化:连续10天呈现动情周期的紊乱、持续动情或间期延长等变化,证实入选的SD大鼠为围绝经期模型。2.实验期间围绝经期SD大鼠一般情况:3组围绝经期SD大鼠精神、饮食、毛色、活动等情况良好,无出血等明显不良反应,无死亡发生,移植组无明显排斥反应。3.围绝经期SD大鼠血清AMH、INHB变化:3组围绝经期SD大鼠成模时及实验时间7d时(即B组和C组末次移植后7d时)的AMH、INHB水平比较,差异无统计学意义(尸>0.05);B组围绝经期大鼠的AMH、INHB水平随移植时间延长逐渐上升,末次移植后14d时与末次移植后7d时、成模时比较差
4、异有统计学意义(尸5、MH、INHB水平明显提高,可能是围绝经期SD大鼠卵巢储备功能提高了的表现之一。提示hUCMSCs移植对延缓围绝经期SD大鼠卵巢储备功能下降有积极意义。4.围绝经期SD大鼠血清性激素变化:3组围绝经期SD大鼠成模时及实验时间7d时E2、P、FSH、LH水平比较差异无统计学意义(尸>O.05);B组围绝经期SD大鼠E2、P水平随移植时间延长逐渐上升,末次移植后14d时与末次移植后7d时、成模时比较差异有统计学意义(P6、比较差异有统计学意义(尸<0.05)。实验时间14d时,B组与A组和C组围绝经期SD大鼠E2、P、FSH、LH水平比较差异有统计学意义(P<0.05);A组和C组比较差异则无统计学意义(胗0.05)。随着实验时间延长,A、C组围绝经期SD大鼠E2、P水平逐渐下降,在实验时间14d时显著低于成模时,差异有统计学意义(尸<0.05)。随着实验时间延长,A、C组围绝经期SD大鼠FSH、LH水平逐渐上升,在实验时间14d时显著高于成模时,差异有统计学意义(尸<0.05)。因此本研究推测,hUCMSCs移植一定时间后对围绝经期SD大鼠性激素7、变化产生显著影响,可能是围绝经期SD大鼠卵巢储备功能提高了的表现之一。提示hUCMSCs移植一定时间后能改善围绝经期SD大鼠卵巢储备功能。5.光镜:HE染色后光镜观察,在实验时间7d,3组围绝经期SD大鼠卵巢的形态学表现为卵巢间质致密,各期卵泡细胞较少,黄体发育不良且数目较少,可见较多的闭锁卵泡,多数颗粒细胞消失。实验时间14d时B组与A、C组比较:光镜下可见卵巢皮质内卵泡形成的状况有所改善,各级卵泡细胞增多;黄体数量及发育状况与A、C组比较数目增多,闭锁卵泡减少。形态学证实hUCMSCs移植一定时间后围绝经期SD大鼠卵巢储备功能8、有所改善。6.电镜:电镜观察,实验时间7d时,3组围绝经期SD大鼠卵巢组织的卵泡内可见颗粒细胞内线粒体较少、肿大,空变及髓鞘样变,滑面内质网不丰富,内质网肿胀扩张,高尔基体肥大。颗粒细胞凋亡,胞质浓缩,线粒体、溶酶体空泡化等细凋亡小体形成。实验时间
5、MH、INHB水平明显提高,可能是围绝经期SD大鼠卵巢储备功能提高了的表现之一。提示hUCMSCs移植对延缓围绝经期SD大鼠卵巢储备功能下降有积极意义。4.围绝经期SD大鼠血清性激素变化:3组围绝经期SD大鼠成模时及实验时间7d时E2、P、FSH、LH水平比较差异无统计学意义(尸>O.05);B组围绝经期SD大鼠E2、P水平随移植时间延长逐渐上升,末次移植后14d时与末次移植后7d时、成模时比较差异有统计学意义(P6、比较差异有统计学意义(尸<0.05)。实验时间14d时,B组与A组和C组围绝经期SD大鼠E2、P、FSH、LH水平比较差异有统计学意义(P<0.05);A组和C组比较差异则无统计学意义(胗0.05)。随着实验时间延长,A、C组围绝经期SD大鼠E2、P水平逐渐下降,在实验时间14d时显著低于成模时,差异有统计学意义(尸<0.05)。随着实验时间延长,A、C组围绝经期SD大鼠FSH、LH水平逐渐上升,在实验时间14d时显著高于成模时,差异有统计学意义(尸<0.05)。因此本研究推测,hUCMSCs移植一定时间后对围绝经期SD大鼠性激素7、变化产生显著影响,可能是围绝经期SD大鼠卵巢储备功能提高了的表现之一。提示hUCMSCs移植一定时间后能改善围绝经期SD大鼠卵巢储备功能。5.光镜:HE染色后光镜观察,在实验时间7d,3组围绝经期SD大鼠卵巢的形态学表现为卵巢间质致密,各期卵泡细胞较少,黄体发育不良且数目较少,可见较多的闭锁卵泡,多数颗粒细胞消失。实验时间14d时B组与A、C组比较:光镜下可见卵巢皮质内卵泡形成的状况有所改善,各级卵泡细胞增多;黄体数量及发育状况与A、C组比较数目增多,闭锁卵泡减少。形态学证实hUCMSCs移植一定时间后围绝经期SD大鼠卵巢储备功能8、有所改善。6.电镜:电镜观察,实验时间7d时,3组围绝经期SD大鼠卵巢组织的卵泡内可见颗粒细胞内线粒体较少、肿大,空变及髓鞘样变,滑面内质网不丰富,内质网肿胀扩张,高尔基体肥大。颗粒细胞凋亡,胞质浓缩,线粒体、溶酶体空泡化等细凋亡小体形成。实验时间
6、比较差异有统计学意义(尸<0.05)。实验时间14d时,B组与A组和C组围绝经期SD大鼠E2、P、FSH、LH水平比较差异有统计学意义(P<0.05);A组和C组比较差异则无统计学意义(胗0.05)。随着实验时间延长,A、C组围绝经期SD大鼠E2、P水平逐渐下降,在实验时间14d时显著低于成模时,差异有统计学意义(尸<0.05)。随着实验时间延长,A、C组围绝经期SD大鼠FSH、LH水平逐渐上升,在实验时间14d时显著高于成模时,差异有统计学意义(尸<0.05)。因此本研究推测,hUCMSCs移植一定时间后对围绝经期SD大鼠性激素
7、变化产生显著影响,可能是围绝经期SD大鼠卵巢储备功能提高了的表现之一。提示hUCMSCs移植一定时间后能改善围绝经期SD大鼠卵巢储备功能。5.光镜:HE染色后光镜观察,在实验时间7d,3组围绝经期SD大鼠卵巢的形态学表现为卵巢间质致密,各期卵泡细胞较少,黄体发育不良且数目较少,可见较多的闭锁卵泡,多数颗粒细胞消失。实验时间14d时B组与A、C组比较:光镜下可见卵巢皮质内卵泡形成的状况有所改善,各级卵泡细胞增多;黄体数量及发育状况与A、C组比较数目增多,闭锁卵泡减少。形态学证实hUCMSCs移植一定时间后围绝经期SD大鼠卵巢储备功能
8、有所改善。6.电镜:电镜观察,实验时间7d时,3组围绝经期SD大鼠卵巢组织的卵泡内可见颗粒细胞内线粒体较少、肿大,空变及髓鞘样变,滑面内质网不丰富,内质网肿胀扩张,高尔基体肥大。颗粒细胞凋亡,胞质浓缩,线粒体、溶酶体空泡化等细凋亡小体形成。实验时间
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