hucmscs移植对围绝经期大鼠卵巢储备功能影响的实验研究

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1、hUCMSCs移植对围绝经期大鼠卵巢储备功能影响的实验研究中文摘要【目的】1．探讨人脐带间充质干细胞(hUCMSCs)移植对自然衰老围绝经期SD大鼠(以下简称围绝经期SD大鼠)卵巢储备功能的影响；2．探讨hUCMSCs移植对围绝经期SD大鼠卵巢组织形态学、细胞超微结构和细胞凋亡的影响；3．探讨hUCMSCs移植提高围绝经期SD大鼠卵巢储备功能的可能途径；4．探讨hUCMSCs移植到围绝经期SD大鼠体内的安全性及可行性。【方法】阴道脱落细胞涂片法监测动情周期变化，筛选出30只月龄13～15个月的SPF级围绝经期SD大鼠模型，随机分为

2、A、B、C组(每组10只)，所有围绝经期SD大鼠生活条件及喂养方式相同。A组不予处理，B组经尾静脉移植浓度为l×106细胞／ml的hUCMSCs单细胞悬液lml，隔日1次，共2次；C组与B组相同方法和实验时间移植细胞缓冲液(以下简称PBS液)lml。于成模时，实验时间7d和14d时(即B组和C组末次移植后7d和14d时)检测各组围绝经期SD大鼠激素：E2、P、LH、FSH的水平，INHB、AMH水平，观察实验时间7d、14d时各组围绝经期SD大鼠卵巢组织形态学、细胞超微结构的变化和细胞凋亡情况。【结果】1．SD大鼠阴道脱落细胞的变

3、化：连续10天呈现动情周期的紊乱、持续动情或间期延长等变化，证实入选的SD大鼠为围绝经期模型。2．实验期间围绝经期SD大鼠一般情况：3组围绝经期SD大鼠精神、饮食、毛色、活动等情况良好，无出血等明显不良反应，无死亡发生，移植组无明显排斥反应。3．围绝经期SD大鼠血清AMH、INHB变化：3组围绝经期SD大鼠成模时及实验时间7d时(即B组和C组末次移植后7d时)的AMH、INHB水平比较，差异无统计学意义(尸>0．05)；B组围绝经期大鼠的AMH、INHB水平随移植时间延长逐渐上升，末次移植后14d时与末次移植后7d时、成模时比较差

4、异有统计学意义(尸

5、MH、INHB水平明显提高，可能是围绝经期SD大鼠卵巢储备功能提高了的表现之一。提示hUCMSCs移植对延缓围绝经期SD大鼠卵巢储备功能下降有积极意义。4．围绝经期SD大鼠血清性激素变化：3组围绝经期SD大鼠成模时及实验时间7d时E2、P、FSH、LH水平比较差异无统计学意义(尸>O．05)；B组围绝经期SD大鼠E2、P水平随移植时间延长逐渐上升，末次移植后14d时与末次移植后7d时、成模时比较差异有统计学意义(P

6、比较差异有统计学意义(尸<0．05)。实验时间14d时，B组与A组和C组围绝经期SD大鼠E2、P、FSH、LH水平比较差异有统计学意义(P<0．05)；A组和C组比较差异则无统计学意义(胗0．05)。随着实验时间延长，A、C组围绝经期SD大鼠E2、P水平逐渐下降，在实验时间14d时显著低于成模时，差异有统计学意义(尸<0．05)。随着实验时间延长，A、C组围绝经期SD大鼠FSH、LH水平逐渐上升，在实验时间14d时显著高于成模时，差异有统计学意义(尸<0．05)。因此本研究推测，hUCMSCs移植一定时间后对围绝经期SD大鼠性激素

7、变化产生显著影响，可能是围绝经期SD大鼠卵巢储备功能提高了的表现之一。提示hUCMSCs移植一定时间后能改善围绝经期SD大鼠卵巢储备功能。5．光镜：HE染色后光镜观察，在实验时间7d，3组围绝经期SD大鼠卵巢的形态学表现为卵巢间质致密，各期卵泡细胞较少，黄体发育不良且数目较少，可见较多的闭锁卵泡，多数颗粒细胞消失。实验时间14d时B组与A、C组比较：光镜下可见卵巢皮质内卵泡形成的状况有所改善，各级卵泡细胞增多；黄体数量及发育状况与A、C组比较数目增多，闭锁卵泡减少。形态学证实hUCMSCs移植一定时间后围绝经期SD大鼠卵巢储备功能

8、有所改善。6．电镜：电镜观察，实验时间7d时，3组围绝经期SD大鼠卵巢组织的卵泡内可见颗粒细胞内线粒体较少、肿大，空变及髓鞘样变，滑面内质网不丰富，内质网肿胀扩张，高尔基体肥大。颗粒细胞凋亡，胞质浓缩，线粒体、溶酶体空泡化等细凋亡小体形成。实验时间