hHGF基因修饰的hUC-MSCs移植在急性心肌梗死模型心肌损伤修复中的作用-论文.pdf

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1、山东医药2014年第54卷第3期·基础研究·hHGF基因修饰的hUC—MSCs移植在急性心肌梗死模型心肌损伤修复中的作用靖文斌。张嵬，杨力，朱德琳，靳继德，张亚东。陈越，刘晓程。孙忠(天津医科大学，天津300070)摘要：目的观察人肝细胞生长因子(hHGF)基因修饰的人脐带间充质干细胞(hUC．MSCs)移植在急性心肌梗死模型心肌损伤修复中的作用。方法用携带hHGF基因的腺病毒基因表达载体以150感染强度(MOI)转染hUC—MSCs，获得hHGF基因修饰的hUC—MSCs。30只广西巴马小型猪制作急性心肌梗死模型。造模成功后的24只猪随机分为A、B、c、D组各6只。C组采用微量注射器将hU

2、C-MSCs悬液经心外膜呈矩阵分布多点注入梗死组织，D组以同样方法注入hHGF基因修饰的hUC-MSCs悬液，B组注入等量PBS，A组只造模。术后6周，经核素心肌灌注显像法检测心肌灌注与心脏功能变化；Masson三色法检测存活心肌，免疫组化法检测新生血管光密度。结果A、B、c、D组灌注质量缺损百分率差值(AMDP)分别为4．33％±1．86％、3．67％±1．21％、一0．83％±1．17％、一0．17％±1．33％，左室射血分数差值(ALVEF)分别为一9．17％±2．48％、一9．33％±2．73％、1．00％±3．22％、0．50％±2．26％，C、D组与A、B组的AMDP、ALVEF

3、比较，P均<0．001。A、B、C、D组在梗死交界区域存活的心肌累计光密度(IOD)值分别为31391±4794、31520±4164、72271-4-4844、79862±3603，新生血管IOD值分别为1363±157、1380±95、4271±398、4782±225，C、D组与A、B组比较，P均<0．001；D组与C组比较，P<0．05。结论hHGF基因修饰的hUC．MSCs可在急性心肌梗死模型的梗死区域内部分存活，在促进血管新生的同时减轻心肌纤维化，改善梗死区域的心肌存活和收缩功能，抑制心室重塑的发生。关键词：心肌梗死；肝细胞生长因子；脐带；间充质干细胞doi：10．3969／j．

4、issn．1002—266X．2014．03．008中图分类号：R542．22文献标志码：A文章编号：1002-266X(2014)03-0023-04据报道，人脐带间充质干细胞(hUC—MSCs)体(．Ad—GFP)、携带hHGF基因的腺病毒基因表达载体外培养扩增经心外膜植入后，可在小型猪急性心梗(Ad·HGF)均购自军事医学科学院放射与辐射医学研模型的梗死区域部分存活并分化为心肌和血管组究所；CM—Dil(美国Invitrogen公司)；v耵兔抗人多织，同时促进固有心肌干细胞的募集和分化，减少细克隆抗体(英国Abcam公司)；Masson三色法染色试胞凋亡和组织纤维化，抑制心室重塑的发生

5、，改善梗剂盒(福州迈新生物技术有限公司)；广西巴马小型猪死区域的心肌灌注和心室功能¨J。基因修饰的干(体质量20—25kg，上海甲干生物科技有限公司)30细胞可将治疗性蛋白输入特定的器官或组织，以满只；图像分析软件ImageProPlus6．0(美国MediaCy．足基因治疗的特定需要，在体内发挥治疗性材料和bernetics公司)；麻醉机、心电监护仪(Detax—Ohmeda持续输送靶基因产物(如促血管新生的生长因子)700，美国)；BX-41共聚焦荧光显微镜(日本Olympus到缺血组织中的载体两种角色，与单纯细胞治疗相公司)。比更具优越性。我们通过在小型猪急性心肌梗死模1．2方法型中移

6、植人肝细胞生长因子(hHGF)基因修饰的1．2．1hUC-MSCs的制备无菌条件下采集脐带hUC-MSCs，观察这种以干细胞为基础的基因治疗是标本并剪成1mm左右大小的组织块，应用组织块否具有促进心肌损伤修复的作用，从而为治疗缺血爬片法分离hUC—MSCs并成功传代扩增至第五代达性心血管疾病提供新的思路和策略。10数量级，流式细胞仪检测细胞表型，实验前采用1材料与方法CM—Dil标记。1．1材料携带绿色荧光蛋白基因的腺病毒载体1．2．2hHGF基因修饰的hUC．MSCs的制备以1．0×105／~L的细胞密度将hUC—MSCs接种至6孑L细胞通信作者：孙忠培养板内，培养24h后，培养基减半为1

7、mL，Ad．GFP23山东医药2014年第54卷第3期以0、50、100、150、200、300的感染强度(Multiplicityof位，27欠／d，连续3d。infection，MOI)转染hUC．MSCs。转染4h后再加入1．2．4心肌灌注及心脏功能变化检测心肌梗死模1mL培养基，于37oC、5％CO饱和度的培养箱内继续型建立后即刻和术后6周，经小型猪耳缘静脉注射培养，48h后在荧光显微镜下观察阳性细胞