猪急性心肌梗死模型的建立

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1、猪急性心肌梗死模型的建立蒋益波，冯毅，丁建东，王宇　[摘要]目的：探讨应用经皮腔内冠状动脉成形术(PTCA)球囊堵闭猪冠状动脉建立急性心肌梗死动物模型的实验方法。方法：选用苏中幼猪12只,麻醉后经股动脉置入PTCA球囊至冠状动脉左回旋支分支,堵闭血流90min，行心电图、血流动力学、心脏二维超声、TTC染色及光镜、电镜检查以判断急性心肌梗死模型是否成功建立。结果：12只猪均完成冠状动脉左回旋支分支的封堵,部分实验动物显示心电图呈典型急性心肌梗死动态图形变化,球囊堵塞1h后超声检查出现心室局部运动异常;堵塞90min再灌注30min后处死猪，取出心肌作TT

2、C染色及光镜、电镜检测，证明成功建立猪急性心肌梗死模型。结论：应用PTCA球囊封堵冠状动脉可成功建立猪急性心肌梗死模型,方法简便易行，具有创伤小、死亡率低等优点。[关键词]心肌梗死；猪；动物模型目前,国外多采用猪做心血管疾病研究的模型。猪的心脏在解剖结构、心脏血管分布、心脏与体重比等方面和人的心脏很相似,特别是其冠状动脉系统侧支交叉分布较少以及不易建立新的侧支循环[1]的特性是大鼠、兔及犬的心脏所不可比拟的。作者在参照文献的基础上,摸索出一套简便易行的方法,成功地建立了猪心肌梗死（心梗）模型。　　1资料与方法1.1动物健康小型猪，由东南大学医学院动物中心

3、提供，均为雄性，体重25~30kg，共12只。1.2TTC染色剂氯化三苯基四氮唑（2，3，5Triphenyltetrazoliumchloride，TTC，Sigma公司）2g加入生理盐水200ml配制成1%的TTC。1．3方法1．3．1实验动物的麻醉基础麻醉：术前禁食8h，安定1mg・kg-1、氯胺酮10mg・kg-1、阿托品1mg肌肉注射。维持麻醉：戊巴比妥钠0.1mg・kg-1・min-1耳静脉维持。气管插管：插管型号7.0，长度28cm，插入长度26cm。呼吸机：容量控制在12ml・kg-1，12次・min-1。给氧浓度60%。1．3.2心梗模

4、型的建立动物取仰卧位，右侧腹股沟部、前胸部及四肢备皮，常规消毒后铺巾，切开皮肤、皮下组织及肌肉，分离暴露出右股动脉。动脉穿刺后经J型0.035in（1in=0.0254m）导丝送入6F（1F=0.33mm）动脉鞘管，肝素100U・kg－1，隔1h静脉注射肝素1000U。用0.035in导丝引导将6FJudkins造影导管送至主动脉根部，注射欧乃派克行左、右冠状动脉造影，明确分析冠状动脉分布，选择左回旋支分支为堵塞目标血管，选用指引导管6FJL（JudkinsLeft）置入左冠状动脉，将0.014in经皮腔内冠状动脉成形术（percutaneousfran

5、sluminalcoronaryangioplasty,PTCA)导丝放至左回旋支分支，造影确认后用压力泵以3~6atm（1atm=101．325kPa）扩张球囊，行缺血预适应三四次，每次球囊充盈20s，间隔3~5min，无明显异常反应后扩张球囊90min。造影证实血流阻塞，90min后将球囊撤出，再灌注30min。在心梗模型建立过程中，接心电监护仪，监测心电图、血流动力学的动态变化，并监测超声心动图的变化。1．3.3心脏标本的染色及光镜检查（1）TTC染色：静脉注射10%KCl20ml将猪处死，迅速开胸取出心脏，用生理盐水将残余血液冲洗干净，垂直于心脏

6、长轴，自心尖向心底将心脏切成4mm厚的短轴面切片，然后置于1%TTC磷酸盐缓冲液中，放入37℃恒温水浴箱20min之后在10%福尔马林中固定。正常心肌染色呈砖红色，坏死心肌呈灰白色。数码相机拍照。（2）HE染色：快速、准确切取心梗区和缺血区、正常区组织（不超过1cm大小），置入10%福尔马林固定液中，固定后行组织修整、洗涤、酒精逐级脱水，二甲苯置换出组织块中的酒精，石蜡包埋，切片机切成4μm的薄片，HE染色，封片，光镜观察。1.3.4标本的电镜检查快速、准确切取心梗区和正常心肌组织约1mm3大小，立即置于4%戊二醛固定液中固定2h，磷酸盐缓冲液漂洗3次，

7、酒精逐级脱水，环氧丙烷浸透20min，由包埋剂包埋样品并聚合（60℃），半簿（500nm）切片定位，超簿（50nm）切片，醋酸铀和枸橼酸铅双重电子染色，电镜观察。1．4统计学处理应用SPSS10.0软件进行统计学处理，计量资料均以x-±s表示，采用t检验进行显著性检验，P0.05为差异有统计学意义。2结果2．1急性心梗模型的制作结果12只猪均完成冠状动脉左回旋支分支的封堵，成功建立急性心梗模型，试验过程中未出现室速、室颤等心律异常，部分实验动物心电图显示呈急性心梗典型图形变化。梗死前后血流动力学无明显变化。见图1、2及表1。A．正常时冠状动脉造影图像表1

8、实验过程中血流动力学的变化注：1mmHg=0.133kPa2.2肌细胞学检查结果