htert基因修饰雪旺细胞移植对脊髓损伤大鼠损伤区神经修复相关蛋白表达的影响

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1、分类号：R3学校代码：10062密级：学号：2010804022硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：hTERT基因修饰雪旺细胞移植对脊髓损伤大鼠损伤区神经修复相关蛋白表达的影响TITLEHTERTgenemediatedSchwanncellstransplantationonspinalcordinjurydamageareaofnerverepairrelatedproteinsinrats一级学科：基础医学二级学科：免疫学论文作者：刘琳琳指导教师：邓为民天津医科大学研究生院二〇一五年五月

2、分类号：R3学校代码：10062密级：学号：2010804022学位类别：科学学位X专业学位£学科门类：医学硕士学位论文MASTER’SDISSERTATION论文题目：hTERT基因修饰雪旺细胞移植对脊髓损伤大鼠损伤区神经修复相关蛋白表达的影响TITLEHTERTgenemediatedSchwanncellstransplantationonspinalcordinjurydamageareaofnerverepairrelatedproteinsinrats一级学科：基础医学二级学科：免疫学论文作者：刘琳琳指导教

3、师：邓为民教授天津医科大学研究生院二〇一五年五月学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下独立进行研究工作取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容和致谢的地方外，论文中不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津医科大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或

4、扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文，并编入有关数据库。保密，在年解密后适用本授权书。本论文属于不保密。（请在相对应的方框内打“√”）学位论文作者签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日天津医科大学硕士学位论文中文摘要目的：以逆转录病毒PLXSN为载体，将hTERT基因转染入体外培养的大鼠雪旺细胞，检测雪旺细胞端粒酶活性及细胞生物学特性的影响。进一步探讨hTERT基因修饰雪旺细胞移植对脊髓损伤大鼠损伤区神经修复相关相关白表达的检测及对神经功能恢复的影响。方法：体外培养大鼠雪旺细胞

5、，经逆转录病毒PLXSN为载体介导端粒酶反转录酶(hTERT)基因转染雪旺细胞，体外培养Wistar大鼠雪旺细胞，经逆转录病毒PLXSN为载体介导端粒酶反转录酶(hTERT)基因转染，分为3组：对照组、阴性转染组、hTERT转染组。用RT-PCR，Westernblot检测雪旺细胞在转染前后hTERT基因和蛋白的表达。应用细胞生长曲线、MTT比色法观察细胞生长的优化作用；采用流式细胞术测定细胞周期分布的变化。成年雌性Wistar大鼠71只，造模成功66只,随机分为对照组，SCs组，hTERT-SCs组,22只/组，按照

6、改良的Allen打击法建立大鼠急性脊髓损伤模型。分别于造模前、造模后1天、3天、1周、2周、3周、4周通过BBB评分、斜板试验、改良的Tarlov评分进行运动功能评定。造模后72h通过RT—PCR、Westernblot检测脊髓损伤区周围AQP4/9、MMP9/2基因转录和蛋白的表达，TUNEL法检测细胞凋亡情况。造模后4周，HE染色及荧光显微镜观测PKH-26标记的SCs存活及分布情况，通过免疫组化法检测GFAP、Nogo及NF200的表达量，行HRP示踪观察神经纤维再生情况，通过SEP和MEP观察大鼠神经电生理恢复

7、情况。结果：通过逆转录病毒PLXSN介导的hTERT基因转染大鼠雪旺细胞后，转染hTERT后,hTERT转染组与对照组、阴性转染组相比hTERT基因和蛋白水平均有表达，细胞的生长速度明显增快，细胞周期G0/G1期减少，S期细胞数增多。各组间有统计学差异（p<0.05）。RT-PCR，Westernblot检测显示转染hTERT基因的大鼠雪旺细胞体外能表达hTERT；大鼠下肢运动功能评价hTERT-SCs组优于SCs组，SCs组优于对照组。造模后72小时hTERT-SCs组细胞凋亡指数均明显低于对照组（p<0.05）.造

8、模后72小时，与对照组相比hTERT-SCs组AQP4/9基因和蛋白表达均较显著降低(p＜0.05）。造模后4周，HE染色对照组可见脊髓组织缺失及脊髓空洞形成，无神经轴索通过。SCs组损伤区可见少量神经轴索样结构，脊髓空洞较小，hTERT-SCs组可见较多神经轴索样结构，未见脊髓空洞。PKH-26标记的阳性细胞数：hTERT-SC