LabChipPCR扩增的线粒体DNA

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1、用Agilent2100生物分析仪和DNA500LabChip分析PCR扩增的线粒体DNA应用国土安全/法医作者这些研究包括这样一些样品，路易17的心脏[2]、沙皇尼古拉二世的遗骸[3]、7000年前的脑组织，以及MarkJensen穴居人的遗骨等。安捷伦科技公司2850CentervilleRoad线粒体是所有真核细胞胞质中存在的亚细胞结构。其Wilmington,DE19808-1610结构是由原始真核细胞结合了细菌细胞派生而来的。USA细菌细胞经过一段时间后与其宿主形成了一种共生关系，最终成为其宿主基本生化结构的一部分。这就是摘要为什么线粒体包含了自己独特的DNA，编码了这些结构

2、中存在的一些蛋白质。PCR扩增线粒体DNA(mtDNA)的序列分析正迅速成为法医测试中公认的手段。法医mtDNA应用关键性的第一步，是确定这1981年FredrickSanger的实验室首次测定了线粒体些扩增产物片段大小、纯度和浓度是否适合序列分析。AgilentDNA的序列。人类mtDNA是一个含有16569个碱基对2100生物分析仪和DNA500LabChip能够准确而精密地测定(bp)的小型环状基因组。目前人类mtDNA的参考序列DNA片段的大小和浓度。在这篇应用报告中，用生物分析仪在是安德森或剑桥参考序列(CRS)(Genebankaccession：序列测定前快速而有效地分析

3、了PCR扩增的DNA片段。M63933)。这一基因组编码了无数参与氧化磷酸化的多肽(蛋白质的亚单位)。这一基因组中还发现了2个核前言糖体RNA和22个反转录RNA的核苷序列。除了这些编近年来mtDNA序列分析的应用正在迅猛增长。1995年码序列以外，线粒体基因组还包含了一个1100bp的非美国国防部认定mtDNA分析可以作为一种可靠的法医编码区域，称为D-loop或控制区。D-loop包含了对人工具[1]。从那时起，美国战争伤亡人员的鉴定开始使类鉴定有用的序列变异。不相关个体之间这一区域的用mtDNA序列分析。911世贸大厦遇难者的遗体也正序列变异为1%-3%。大多数序列变异都发生在控

4、制区在用mtDNA序列测定的方法进行分析。除了这些法医的两个部分，超变异区1(HV1)和超变异区2(HV2)。应用以外，mtDNA还被用于历史和人类学样品的研究。线粒体DNA序列直接从母体遗传。除非发生突变，一个标准进行比对。标准的浓度范围通常至少要覆盖否则兄弟姐妹和所有母系亲属都拥有相同的mtDNA。三个数量级，因为也有必要对未预料到的任何第二种由于mtDNA不会经过重组，所以母系亲属上溯几代PCR产物进行定量。这类分析的准确度很低，因为浓都能提供有用的基因样品。这些序列信息在人员失踪度的估算误差经常会超过100%。由于这一原因，目案件中常常相当有用。在法医案例中，mtDNA序列标与

5、非目标PCR产物比例的计算也存在相当的问题。更常用的是排除而不是确定犯罪嫌疑人，因为同一家族中的许多人都拥有相同的mtDNA序列。Agilent2100生物分析仪是第一台可用于核酸分离的芯片类商品系统，它可以克服凝胶电泳的局限性。细胞核只有一个拷贝的基因组DNA，而细胞质中可Agilent2100生物分析仪在微型通道中对核酸片段进行能有1000多拷贝的mtDNA。由于每个细胞都含有多分离，并进行自动检测，以及在线数据处理。Agilent个mtDNA拷贝，所以只需要几个细胞就能进行序列2100生物分析仪连接在一台PC机上，以进行运行控分析。要进行mtDNA样品的序列分析，通常需要提制和自

6、动数据分析。取DNA，并用聚合酶链反应(PCR)扩增变异区域。因为扩增能把目标DNA的几个拷贝转变成几亿个拷贝，用Agilent2100生物分析仪分析PCR产物，与经典的凝所以有限的或腐败很严重的样品也能进行序列分析，胶电泳相比，有几个重要的优点。由于使用了短分离例如骨头、牙齿或头发。通道和高电场，与凝胶电泳相比，显著提高了分析速度。仪器装配了荧光检测系统，因而带来了卓越的检测灵敏度。预包装的试剂和工具包，与标准化的操作方案，使数据的重复性更好。这些工具包还有助于提PCR扩增mtDNA的分析高不同运行批次、不同芯片和仪器之间的重复性。与扩增mtDNAHV区的PCR次数取决于样品的年代和

7、条凝胶扫描系统的数据处理方式相比，手工定量的成分件。如果mtDNA降解极少，每个HV区只需要进行一明显减少，数据分析都是以自动方式进行的。样品和次PCR。反应产物大约450bp长。长期暴露在潮湿、试剂消耗降低到1至几微升，最大限度地减少了与有高温和细菌条件下，DNA将发生明显降解，因此断害物质的接触，降低了废弃物的量。裂成较小的碎片。降解样品中mtDNA的平均片段长有几种试剂盒可用于各种核酸样品的分析。DNA500度可能比450bp小得多。由于