免疫组操作规程

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1、南通医学院附属医院检验科质量手册第1版免疫篇﹒作业指导书免疫专业组作业指导书249南通医学院附属医院检验科质量手册第1版免疫篇﹒作业指导书两对半测定标准操作程序(SOP-301)1．目的：定性或半定量检测临床血液标本中乙肝病毒的标志物（HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb）。2．SOP-301变动程序：由操作者提出并经科主任审核。3．范围：适用于血清或血浆类标本用于乙型肝炎的辅助诊断及疗效观察。4．溯源：全国临床检验操作规程（第二版）。5.操作程序本实验用“深圳月亮湾生物工程有限公司”提供的试剂盒，采用ELISA原理来检测乙肝标志物五

2、项。适用于血清或血浆类标本。5.1实验原理：以检测乙肝表面抗原为例。采用单克隆抗-HBs包被反应板，加入待测标本，同时加入多克隆抗-HBs-HRP,当标本中存在HbsAg时，该HbsAg与包被抗-HBs结合，并与抗-HBs-HRP结合，形成抗-HBs-HbsAg-抗-HBs-HRP复合物，加入TMB底物产生显色反应。5.2试剂盒组成：5.2.1微孔反应板：96人份，可根据标本多少拆分使用。5.2.2酶结合物、阳性对照、阴性对照。5.2.3显色剂A，显色剂B，终止液，封片。5.2.4洗涤液20ml/1瓶，用前以蒸馏水做20倍稀释。5.2.5表面抗原质控品（1

3、ｎｇ/ml）,由卫生部临床检验中心提供。5.3测定步骤：采用意大利Alisei全自动免疫分析仪进行分析检测。仪器自动进行加样、稀释、洗板、比色、分析结果、打印报告。仪器检测过程如下：5.3.1根据试剂盒说明书编排检测程序（包括样品用量、试剂用量、孵育时间、洗板次数、比色波长、结果判断标准等）。5.3.2输入工作表。5.3.3分离血清，将血清样品装入样品盘。5.3.4根据仪器要求的位置和用量装载各种试剂、质控及阴、阳性对照。5.3.5根据仪器要求装载酶标板5.3.6在一切准备充分之后，按动“start”，仪器自动进行加样、稀释、孵育、洗板、比色、判断结果、最

4、终打印报告。5.4结果判断：采用双波长比色，比色波长450nm，参考波长630nm，比色后仪器自动作出判断。正向2.1×0.05附：HbsAg：正向2.1×0.05HbsAb：正向2.1×0.05HbeAg：正向2.1×0.05HbeAb：反向NC×0.2249南通医学院附属医院检验科质量手册第1版免疫篇﹒作业指导书HbcAb：反向NC×0.2。5.5注意事项：5.5.1试剂5.5.1.1从冷藏环境中取出的试剂盒内全部瓶装试剂及待测标本所需微孔反应条应置37℃平衡30分钟后方可使用，余者应及时封存于冰箱中以备后用。5.5.1.2试剂盘上的各种试剂、质控及阴

5、、阳性对照需及时补充和定期更换。5.5.1.3做完后及时将试剂盘放入4℃冰箱保存。5.5.1.4不同批号的试剂不可混用，所用试剂必须在有效期内。5.5.2标本5.5.21建议空腹抽血，采血时避免溶血。5.5.22注意将样品放置实验室固定样品区。5.5.23当天不能检测的样品应编号分离血清，存放在4℃冰箱，以防止溶血。5.5.24每份化验单都需要分类保存，所有化验单都需网上确认。5.5.25待测标本不可用NaN3防腐，如需稀释标本，请用小牛血清稀释。5.5.3结果5.5.3.1报告前做好三查四对。5.5.3.2出现HBeAb、HBcAb阳性结果而HBsAg呈

6、阴性时，需用定量法复查，以免HBsAg过剩，强阳性漏检。5.5.3.3单HBsAg、HBsAg和HBeAg或HBsAg和HBeAb阳性或其他可疑结果时，用定量法重做。5.6乙肝标志物报告及临床意义：序号HBsAg抗HBse抗原抗HBe抗HBc说明1+-+-+急肝，慢性活动期，有传染性2+--++恢复期，弱传染性3---++恢复期，弱传染性4+---+急肝或慢性HBsAg携带者5-+-++康复期6-+--+既往感染过，仍有免疫力7-+---康复期，主动，被动免疫后8-----未感染过HBV授权人质量负责人部门负责人操作人员姓名日期249南通医学院附属医院检验

7、科质量手册第1版免疫篇﹒作业指导书乙型肝炎病毒HBc-IgM测定标准操作程序(SOP-302)1.目的：定性或半定量检测临床血清中乙型肝炎病毒HBc-IgM。2．SOP-302变动程序：由操作者提出并经科主任审核。3．范围：适用于血清或血浆类标本，用于乙型肝炎早期诊断。4.溯源：全国临床检验操作规程（第二版）。5．操作程序：本实验用“深圳月亮湾生物工程有限公司”提供的试剂盒，采用ELISA捕获法检测乙型肝炎IGM型核心抗体。5.1实验原理：用抗人μ链抗体包被酶标板，用以捕获血清中IGM类抗体，再加HBcAg与特异性抗HBc-IgM结合，而后加HRP-抗HB

8、c与HBcAg相结合，最后加底物显色。显色的深浅与HBc-IgM的