C3d的免疫负调控作用及其可能的机制

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1、英文缩写缩写英文名称中文名称APCAntigenpresentingcells抗原提呈细胞BCRBcellreceptorB细胞受体CEACarcinoembryonicantigen癌胚抗原ConAConcanavalinA刀豆蛋白ACPMCountsperminute每分钟计数CR2Complementreceptor2补体受体2CadComplement3d补体CadDEPCDiethylpyrocabonate焦碳酸二乙酷EGFREpidermalgrowthfactorreceptor表皮生长因子受

2、体ehCGEctopichCG异位人绒毛膜促性腺激素ELISAEnzyme-linkedimmunosorbentassay酶联免疫吸附实验FAGSFluorescence-activatedcellsorting荧光激活细胞分类FDCFolliculardendriticcells滤泡树突状细胞HBVHepatitisBvirus乙型肝炎病毒hCGHumanchorionicgonadotrophin人绒毛膜促性腺激素HECDHumanextracellulardomain人(HER-2/neu)胞外区H江

3、Henegglysozyme鸡溶菌酶蛋白HVHumanimmunodeficiencyvirus人类免疫缺陷病毒开乐Interferon-y干扰素-YIL-4Interleukin-4白介素_qMajorhistocompatibilitycomplex主要组织相容性抗原Stimulatingindex刺激指数RIARadioimmunoassay放射免疫实验Reversetranscription-polymerasechain逆转录聚合酶联反应rea以ionCad的免疫负调佼作用及其可能的机制中文摘要中文

4、摘要Cad的免疫负调控作用及其可能的机制关键词:C3d;负调控:人绒毛膜促性腺激素j3(hCG(3);HER-21neu;HBV-preS2/S;基因免疫补体C3d片段是补体C3的裂解片段，被认为是C3分子。链不能被蛋白酶再裂解并仍保持与抗原共价连接的最小片段。Cad与其特异性受体CR2结合后，能提供共刺激信号，促进B细胞活化、促进抗体的亲和力成熟、维持免疫记忆。近来文献报道，抗原与三拷贝C3d分子偶联成为融合蛋白，能增强该抗原的免疫原性，我们的研究也证实三拷贝C3d可以增强基因免疫诱导的HBV特异性免疫应答

5、，这提示C3d是一种很好的分子佐剂。异位人绒毛膜促性腺激素(ehCG)与肿瘤的发生、发展存在着相关性，以ehCG为靶抗原的抗肿瘤疫苗成为肿瘤生物治疗新的热点。在以往的研究中我们构建了基于ehCGp的抗肿瘤基因疫苗，免疫小鼠后产生了较强的特异性免疫应答，并具有较强的抗肿瘤作用。为了增强。hCG(3肿瘤基因疫苗的抗肿瘤效果，我们将三拷贝C3d分子引入该基因疫苗。结果发现，Cad不仅不能增强基因免疫诱导的hCGp体液免疫应答，反而明显地抑制此应答。这提示三拷贝C3d的作用可能并不总是免疫增强作用，也可能具有免疫抑制

6、作用，这还尚未见报道。为了证明三拷贝C3d的免疫负调控作用，本课题分别选择hCGP,HER-21neu,HBV-preS2(S作为模式抗原，设计相应的基因疫苗，通过基因免疫手段免疫小鼠以观察C3d对特异性免疫应答的调节作用，并探讨其可能的机制。第一部分C3d的免疫负调控现象在以前的研究中我们曾发现C3d抑制hC邻诱导的体液免疫应答，为确证C3d对hCG(3免疫应答的负调控作用，我们进行了本部分研究。采用酶切法获得hCGO链的编码基因(513bp)，定向克隆入TR421和TR421-C3d3质粒，获得hCG(3

7、的真核表达载体TR421-hCGO及TR421-hC邵-C3d3重组质粒。为观察hCGp基因疫苗在真核细胞内的表达，用脂质体法将TR421,TR421-hCGO及TR421-hCGp-C3d3质粒转复旦大学硕士论文Cad的免疫负调控作用及其可能的机制中文摘要染人肝癌细胞系一7721细胞。放射免疫法检测细胞培养上清发现:重组质粒TR421-hCGp及TR421-hCGp-C3d3可在真核细胞中表达hCGp，而TR421-hCG(3-C3d3质粒在真核细胞中表达hC邱的量明显低于TR421-hCGO组。在此研究基

8、础上我们探讨了Cad对hCGp基因疫苗诱生的特异性体液免疫应答的调节作用。以100EtgTR421、TR421-hCG(3及TR421-hCG/3-06免疫雌性BALB/c小鼠，ELISA法检测血清抗一hCGp-IgG抗体，结果显示所有TR421-hCGp质粒基因免疫小鼠能够诱导高水平的抗一hCG(3-IgG特异性抗体，而TR421-hCGJ3-00质粒免疫小鼠诱导的抗体水平较低，两组相比有显著性差