解偶联蛋白2在酒精性肝病中的表达及意义

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2、的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：≥彩导师签名：l习剁《炒8年弓月趑日中文摘要解偶联蛋白2在酒精性肝病中的表达及意义摘要目的：酒精性肝病(alcoholicliverdisease，ALD)是长期大量饮酒所致的肝脏损害性病变，其病理改变包括酒精性脂肪肝、酒精性脂肪性肝炎、酒精性肝纤维化及酒精性肝硬化。关于ALD的发病机理目前尚不清楚，近年来有人提出以氧化应激和脂质过氧化为中心的“二次打击”假说，“第一次打

3、击”使脂类沉积在肝细胞，导致脂肪肝，“第二次打击”涉及内毒素、细胞因子参与的氧化应激和脂质过氧化。氧化应激和内毒素是ALD发病过程中不可分割的两个中心环节，二者均可激活Kupffer细胞，活化的Kupffer细胞通过产生氧自由基和分泌细胞因子招募中性粒细胞、淋巴细胞浸润引起肝内炎症反应参与ALD的发病。解偶联蛋白(uncouplingproteins，UCPs)是线粒体内膜上可以调节质子跨膜转运的载体蛋白，具有解偶联活性。目前共发现5种亚型，分别为UCPl、UCP2、UCP3、UCP4和UCP5，其中UCP2虽无组织特异性，但在正常肝组织中仅

4、在Kupffer细胞表达，肝细胞无表达或表达水平很低，当肝组织受损时，肝细胞则大量表达UCP2。UCP2可以通过调节质子跨膜转运参与能量消耗和脂质代谢，可能参与ALD的氧化应激与脂质过氧化。本研究旨在应用酒精灌胃建立大鼠ALD模型，用免疫组织化学染色及逆转录聚合酶链反应(reversetranscription—polymerasechainreaction，RT-PCR)的方法观察UCP2蛋白及UCP2mRNA的表达情况，探讨UCP2在ALD发病过程的表中文摘要达及意义，为有效防治ALD提供新的思路。方法：选用雄性健康清洁级Wister大鼠

5、50只，体重200士209，正常饲养1周后随机分出10只为正常对照组，其余动物采用逐渐增加酒精浓度(浓度30％．60％，乙醇5．99·始-1．dJ)的方法酒精灌胃，分别于4周、8周、12周和16周末随机处死动物8只、8只、8只和9只，留取血清及肝组织标本并制备10％的肝匀浆，应用日本OLYMPUSAU．600全自动生化分析仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(alanineaminotransferase，ALT)，天冬氨酸氨基转移酶(aspartateaminotransferase，AST)和乙酰胆碱酯酶(cholinesterase，CHE)；应

6、用比色法检测肝匀浆肝组织蛋白含量，以g(mg)为单位分别测定肝匀浆甘油三酯(triglyceride，TG)、氧自由基(oxygenfreeradical。OFR)、丙二醛(malondialdehyde，MDA)和超氧化物歧化酶(superoxidedismutase，SOD)的含量；应用酶联免疫吸附(enzyme．1inkedimmunosorbentassay,ELISA)法检测血清白细胞介素1p(interleukin1beta，IL．113)、IL．6和肿瘤坏死因子0【(tumornecrosisfactor仅，TNF．0【)；取部

7、分肝组织立即冰冻切片行苏丹Ⅳ染色，观察肝细胞脂变性情况；另取肝组织固定于4％中性福尔马林溶液，石蜡包埋，5岬切片行苏木精．伊红(hematoxylin．eosin，HE)染色观察肝组织的普通病理改变，天狼红染色观察肝组织纤维化程度，DPAS染色观察肝组织Kupffer细胞的变化；并用石蜡切片进行UCP2免疫组织化学染色，观察肝组织UCP2蛋白表达情况；余肝组织经液氮速冻后置于一80℃冰箱，用RT-PCR观察大鼠肝组织UCP2mRNA的表达。中文摘要结果：1血清生化指标的变化：随着造模时间的延长，血清ALT和AST水平逐渐升高，CHE逐渐降低，

8、与正常对照组比较P<0．05或P<0．01。2血清细胞因子水平的变化：随着造模时间的延长，血清IL．1D、IL一6和TNF．0【含量逐渐升高，与正常对照组比较P<0