稻瘟病菌一假定α-甘露糖苷酶多克隆抗体的制备及应用

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1、巾国蓉学通报2010，26(22)：271—276ChineseAgriculturalScienceBulletin稻瘟病菌一假定一甘露糖苷酶多克隆抗体的制备及应用吴丽民1,2刘丽华，洪伟雄，王宗华，汪世华，鲁国东(福建农林大学生物农药与化学生物学教育部重点实验室，福州350002；福建生物工程职业技术学院，福州350002)摘要：为检测一甘露糖苷酶的表达及其可能的功能，制备了稻瘟病菌一假定O／一甘露糖苷酶多克隆抗体，并探索其可能应用。将与一His标签融合的过量表达一假定Ot一甘露糖苷酶蛋白的稻瘟病菌转化子，在液体完全培养基中培养，收集其上清液，经Ni2+-NTA亲和柱纯化后，得到可溶的融

2、合蛋白一甘露糖苷酶一His。纯化后的融合蛋白免疫新西兰兔，得到抗．甘露糖苷酶蛋白的多克隆抗体，ELISA检测结果表明抗体效价达l：51200，特异性高。利用该多克隆抗体以ELISA方法检测并Western验证分析稻瘟病菌30个田间菌株培养液Od一甘露糖苷酶的表达量。不同菌株一甘露糖苷酶表达量有明显差异。进一步分析表明，茵株7O一15接种水稻后，不同时期一甘露糖苷酶的表达量差异明显。菌株间致病型等生物学和生理学差异可能与一甘露糖苷酶表达的差异有关。关键词：稻瘟病菌；一甘露糖苷酶；多克隆抗体；ELISA；Western印迹分析中图分类号：0814文献标志码：B论文编号：2010—2426APol

3、yclonalAntibodyofaPutataive一MannosidasefromMagnaportheoryzaeanditsPossibleUseWuLimin，LiuLihua，HongWeixiong，WangZonghua，WangShihua，LuGuodong(KeyLaboratoryofBio-pesticideandChemistryBiology，MinistryEducation；FujianAgricultureandForestry，Fuzhou350002；FujianEngineeringBiotechnologyCollege，Fuzhou350002)

4、Abstract：InordertodetectexpressionofOL—MannosidaseandstudyitspossiblefunctionduringinfectionofMagnaportheolyzae,apolyclonalantibodyofaputativea-Mannosidasewasprepared．AtransformantofMagnaportheolyzae,overexpressingaputativeoz-Mannosidase—-Histagfusionproteinwasgrowninliquidmedia．The—Mannosidasefusi

5、onproteinwaspurifiedbyNi-NTAaffinitychromatographycolumnfromculturefiltrate．ThefusionproteinwastheninjectedintoandusedtoimmuneNewZealandrabbitstoproducepolyclonalantibody．Thetiterofthispolyclonalantibodywas1：51200andwithgoodspecificityafterELISAanalysis．Proteinof30oryzaestrainsweretestedagainstthis

6、antibodyusingELISAandWesternblottingshowthattheexpressionlevelofthea-Mannosidaseappearedtobesignificantlydiferentamongstrainsaswellasinfectionstageswheninoculatedwiththestrain70—15．Thedifferenceexpressionlevelofthe—Mannosidaseamongdifferentstrainsmayberelatedtothephysiologicalandbiologicalcharacter

7、isticsuchaspathogenicityofthefungus．Keywords：Magnaportheoryzae；a-Mannosidase；antibodypreparation；ELISA；Westernblotting基金项目：国家自然基金项目(30471132，30500325，30671348)。第一作者简介：吴丽民，女，1969年出生，浙江人，实验师，博士研究生，研究方向：分子植物病理