月季丁香酚合成酶基因的克隆及其表达分析

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1、园艺学报2012，39（7）：1387–1394http://www.ahs.ac.cnActaHorticulturaeSinicaE-mail:yuanyixuebao@126.com月季（Rosachinensis）丁香酚合成酶基因RcEGS1的克隆及其表达分析1,2222222王海萍，晏慧君，张颢，蹇洪英，王其刚，邱显钦，李淑斌，21,2,*周宁宁，唐开学12（华中农业大学园艺林学学院，武汉430070；云南省农业科学院花卉研究所，云南省花卉育种重点实验室，昆明650205）摘要：根据GenBank发表的丁香酚合成酶（EGS）基因的蛋白保守序列设计引物，利用RT-PCR结合R

2、ACE-PCR技术，从古老月季（Rosachinensis）品种‘月月粉’盛开期的花瓣中获得了1个新的丁香酚合成酶基因RcEGS1，GenBank登录号为JQ522949。该基因全长为1171bp，开放阅读框（ORF）951bp，编码317个氨基酸；蛋白质理论分子量为35.64kD，等电点为7.36。氨基酸同源性分析表明，RcEGS1与矮牵牛PhIGS1的氨基酸同源性达到70%，与罗勒ObEGS1的同源性为59%，与月季RhEGS1的同源性仅为48.2%。运用实时荧光定量PCR法分析RcEGS1在不同组织部位和不同开放时期花瓣中的表达，发现其在叶片和茎段中没有表达，在花瓣和萼片中有表

3、达，在盛开期的花瓣中表达量最高。关键词：月季；花香；丁香酚合成酶基因；实时定量PCR中图分类号：S685.12文献标识码：A文章编号：0513-353X（2012）07-1387-08CloningandExpressionAnalysisofEugenolSynthaseGeneRcEGS1inRosachinensis‘Pallida’1,222222WANGHai-ping，YANHui-jun，ZHANGHao，JIANHong-ying，WANGQi-gang，QIUXian-qin，221,2,*LIShu-bin，ZHOUNing-ning，andTANGKai-xue

4、12（CollegeofHorticultureandForestrySciences，HuazhongAgriculturalUniversity，Wuhan430070，China；YunnanFlowerBreedingKeyLab，FlowerResearchInstitute，YunnanAcademyofAgriculturalSciences，Kunming650205，China）Abstract：UsingPCRdegenerateprimersdesignedbasedonGenBankpublishedtheconservedproteinsequencesof

5、eugenolsynthasegenestoamplifycDNAfragmentsbyRT-PCRandRACE-PCR，aneweugenolsynthasegenenamedRcEGS1wasclonedfromtheflowerpetalofRosachinensis‘Pallida’，anditsGenBankaccessionnumberisJQ522949.ThefullcDNAwas1171bpinlengthwithanopenreadingframe（ORF）of951bpencodingaproteinof317aminoacids.Molecularweigh

6、tandisoelectricpointoftheproteinwas35.64kDand7.36，respectively.AminoacidshomologyanalysisindicatedthattheRcEGS1andRhEGS1proteinsare47.7%identicaltoeachother，andhad70%and59%homologieswithCbEGS2inClarkiabreweriandPhEGS1inPetuniahybirida，respectively.TheexpressionprofileofRcEGS1indifferenttissuesa

7、nddifferentdevelopmentalstagesofroseflowerwasanalyzedbyquantitative收稿日期：2012–02–07；修回日期：2012–05–11基金项目：国家自然科学基金项目（31060268）；云南省青年基金项目（2010CD097）；云南省科技创新强省计划项目（2007C0004Z）*通信作者Authorforcorrespondence（E-mail：kxtang@hotmail.com）1388园