α内收蛋白基因Gly460Trp多态性对原发性高血压的影响

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1、河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师(或指导小组)的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。～签名弘澎导零遨髫冀笞导誓。研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，．文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立

2、撰写，文责自负。研究生签名舡．；善导师签名：之曼串苫、1万、9#年，月日中文摘要仅．内收蛋白基因Gly460Trp多态性对原发性高血压的影响摘要目的：原发性高血压是一种遗传因素和环境因素共同引起的多基因遗传病，具有种族差异、外显迟滞和异质性等特征。内收蛋白是由眠D、Y3种亚单位构成的异源二聚体或异源四聚体，它的异型分子在红细胞、脑、肺、肾、肝脏等组织中均已检出。内收蛋白三个亚单位结构相近均可分为氨基端球形头部，颈部和羧基端尾部。其中a．内收蛋白受Ca2+／钙调蛋白、蛋白激酶C和蛋白激酶A的调节，参与细胞信号转导。此外，Q．内收蛋白还与膜骨架的其他成分(如spectrin和actin

3、等)及多种膜蛋白(如离子通道、交换体和离子泵等)相互作用，参与细胞膜离子转运，尤其与多种细胞膜Na+转运、Na+．H+交换、Na+．K+．CI’协同转运系统、Na+．Li+反转运及钠泵活性密切相关，进而影响血压。人类洳内收蛋白定位于4号染色体(4p16．3)，第10个外显子存在G614T单核苷酸多态性，导致编码该蛋白的460位甘氨酸(Gly)被色氨酸(Trp>替换。本实验以我国北方汉族人群为研究对象，采用PCR．RFLP和DNA序列测定等方法，对仅．内收蛋白基因第10外显子部分DNA序列进行分析，进一步明确我国北方汉族人0【．内收蛋白基因Gly460Trp多态性与原发性高血压的关系

4、。方法：以160例北方汉族原发性高血压患者和151例血压正常者为研究对象，血压测量采用校正的汞柱式血压计，中文摘要测量上臂血压，患者测血压前15分钟不吸烟，背靠静坐5分钟；入选前测量非同日3次血压，取平均值；血压测量在标准状态下进行，即每天同一时间、同侧臂、用相同血压计、由同一测量人完成。入选标准为2005年我国高血压防治指南：有明确原发性高血压病史并且已服用抗高血压药物治疗者；未服用抗高血压药物，且非同日2次测得收缩压≥140mmHg和／或舒张压≥90mmHg，排除继发性高血压、糖尿病、冠心病、高脂血症、严重肝肾功能障碍者。其入选者为满足上述原发性高血压入选标准，且无高血压家族史

5、，排除继发性高血压、糖尿病、冠心病、高脂血症、严重肝肾功能障碍者，入选的各个研究对象之间无亲缘关系。登记每个研究对象的一般临床资料并检测相关生化指标，包括：性别、年龄、家族史、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL．C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL．C)。所有研究对象需空腹12小时以上，于清晨取坐位采血，采集肘正中静脉血。各血样按相应生化指标检测要求做预处理：离心、分离上清，置于．80℃超低温冰箱保存等，待标本收集完成后同批测定，以减小批间误差。用含有抗凝剂的真空抽血管另外抽2ml静脉血，充分混匀后置于．80℃超低温冰箱保

6、存，用于基因组DNA的提取。采用传统的酚／氯仿抽提法，从外周血白细胞中提取基因组DNA，采用聚合酶链反应(PCR—RFLP)方法检测值．内收蛋白第10外显子基因G614T(G为鸟嘌呤，T为胸腺嘧啶)的基因多态性，试剂主要有：磷酸缓冲溶液(PBS)、蛋白酶K(ProNaseK)、抽提Buffer、7蹦s饱和酚、氯仿、异戊醇、中文摘要无水乙醇等。其他实验试剂和仪器有：聚合酶链反应引物(上海生物工程技术服务有限公司)、dNTPs(北京赛百盛基因技术有限公司)、DNAmarker、RedTaqDNA聚合酶(北京赛百盛基因技术有限公司)、12％聚丙烯酰胺胶(PAG)、限制性内切酶(北京纽英伦

7、生物技术有限公司)、英国HvbaidExpress全自动扩增仪、美国Kodak凝胶成像系统。所有数据采用SAS6．12统计软件进行数据分析。基因频率采用基因计数法，等位基因频率比例采用卡方检验，计量资料均以均数4-标准差表示，计数资料以频数表示。Hardy-Weinberg平衡检验、组间基因型及等位基因频率的比较用四格表f检验；不同基因型的血压及指标差异采用两独立样本的t检验。P<0．05认为有统计学意义。结果：1．一般临床资料及生化指标比较：两组间在平均年龄、TC、