肾素基因多态性与原发性高血压的关联性研究

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1、594以科学发展观捉进科技创新(上)肾素基因多态性与原发性高血压的关联性研究布艾加尔·哈斯木1中山智祥2程祖亨3胡大一11．同济大学医学院，上海，200092；2．日本大学板桥医院，东京，173—86103新疆医科大学第一附属医院心脏中心，乌鲁木齐，830054摘要目的：探讨肾素基因新多态性与原发性高血压的关联性。方法：运用PCR—SS—CP方法。时肾素基因外显子4～8进行扫描，以发现新的多态性；运用PCR—RFLP确定新的多态性厦外显子9上的错义突变G1051A的基因型；最后对多个位点基因型进行单体型分析，在日本人212例原发性高血压(EH)者

2、和209倒正常血压(NT)者中进行病例对照研究。结果：PCR—SSCP法发现1)外显子4下游第17碱基对处内含子4区域的一个单核苷酸多态性(SNP)T+17int4G；2)外显子8上游第18碱基对处内含子7区域可变数目串联重复序列(VNTR)。重复7～12次的TCTG。DNA测序确定以上=者为多态性。VNTR和T+17int4G的基因型频率在原发性高血压和正常血压组中无显著性差异，G1051A的G等住基因频率原发性离血压组显著高于正常血压组(P<0．05)。单体型分析结果显示单体型总的分布两组间有显著性差异(P<0．05)。基因型G／G的血浆肾素

3、活性明显高于A／A和G／A。结论：内金子4的T+17int4GSNP和内含子7的vNTR与日本人原发性高血压无关联性。外显子9上错义突变G105IA可能影响肾素的酶活性，从而与原发性高血压有关联性。G／G基因型的血浆肾素活性明显高于刖A和G／g基因型。关键词原发性高血压肾素基因多态性单体型高血压作为一种常见病、多发病日益受到人们的重视，原发性高血压是由遗传和环境因素决定的多基因遗传病，寻找其相关及致病基因为近年研究的重点。肾素一血管紧张素系统(renin—angiotenslnsystem，RAS)是调节血压和水盐代谢的主要激素，在原发性高血压的

4、发病中起重要作用，控制这一系统的基因可能与高血压的发生发展有关。肾素是RAS激活的限速酶，因此肾索基因是原发性高血压(EssentialHypertension，EH)很有吸引力的候选基因之一。人类肾素基因位于第l号染色体长臂(1q32)+基因组DNA全长12．5kb，包含10个外显子和9个内含子。我们从美国国家生物技术信息中心查出肾素基因的信息：在外显子1，2，3，9，10上含有7个单核苷酸多态性(SNPs)，在这些SNPs中，只有外显子9上的(G1051A)引起氨基酸置换(V351I)，到目前为止，在外显子4，5，6，7，8中尚未发现SNPs

5、。故我们拟用PCR—SSCP方法对外显子4～8进行扫描，希望能发现新的SNPs。如发现新的SNPs，则测序确定，进一步用PCR—RFLP法确定其基因型，并进行单体型分析，研究肾素基因多态性与日本人原发性高血压的关联性。一、资料与方法(一)研究对象高血压组(EH)212例，男124例，女88侧；平均年龄49．5±13．1岁；均来自日本大学板桥医院住院以科学发展观促进科技创新(三)595及门诊患者，按照WHO诊断标准，收缩压≥21．3kPa和／或舒张压≥12．7kPa，排除继发性高血压，阳性高血压家族史定义为父母中有一方或者同胞兄弟姐妹中至少有一位患

6、高血压。正常血压组(NT)209例，男157例，女52例；平均年龄498±66岁；均来自健康体检人群，按照WHO诊断标准，SBP<187kPa和／或DBP<12kPa，家族中一级亲属没有原发性高血压病史．排除糖尿病及其他心血管系统疾病。(二)一般项目得到所有研究对象的知情同意后进行病史采集及常规体检，测身高、体重、SBP、DBP，并由日本大学医院临床检验科用标准方法检测血清胆固醇、甘油三酯、肌酐、尿素氮、血尿酸、血糖水平及血浆肾紊活性。(三)多态性住．是的检测与基因分析1．基因组DNA制备取外周血10mL，分离白细胞，常规酚氯仿法制备基因组DNA

7、。2．PCR—SSCP法根据NCBI提供的肾素基因全部序列(基因组数据库编号NT004662)设计引物如下。上游引物下游引物exon45’CCACAA『rGCACCCTC￡CTCTGAGC3’5’ACAGAAGGGGTCCGGGGCAGATGA～3’exon55。GTGTGGAAGCCCAGACCAGACTCCAA35’TGTCGAAGATAGGGGTGACCCTGc一3exon55‘GGGGTTGTGGGCATGGGCTTCATTG一3+5’CACTCC(℃ATcTCTTcTCCCCTCCTGT一3’exon65’GCCTCTTGGTGACTO

8、CATI、孤TGA一3’5’TGGGCCGGTGGCGTGTGTAATTCrAGG3。exon75’(圮AAccllCCOCAATTGC