银杏内酯b对内皮细胞连接蛋白的影响及其分子机制研究

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1、·646·中国药理学通报ChinesePharmacologicalBulletin2014May；30(5)：646～51网络出版时间：2014-4一l814：13网络出版地址：http：／／www．cnki．net／kcms／doi／lO．3969／j．issn．1001—1978．2014．05．013．html银杏内酯B对内皮细胞连接蛋白的影响及其分子机制研究刘雪青，陈北冬，鲍利，吴伟，孙文佳，齐若梅(卫生部北京医院／老年医学研究所，卫生部老年医学重点实验室，北京100730)doi：10．3969／j．issn．1001—1978．2014．05．013血管渗透性增高，炎症细

2、胞向血管内膜下浸润，促进文献标志码：A文章编号：1001—1978(2014)05—0646—06动脉粥样硬化的血管炎症反应。中国图书分类号：R284．1；R322．123；R329．2；R341；R543．3；内皮细胞连接蛋白功能主要包括紧密连接R977．6(tightjunction，TJ)、缝隙连接(gapjunction，GAP)和摘要：目的探讨银杏内酯B对人脐静脉内皮细胞连接蛋白黏着连接(adherensjunction，AJ)。JAM．A(junctional以及血管渗透性的影响。方法用银杏内酯B(0．2、0．4、adhesionmoleculeA)是参与构成紧密连接复合体

3、的0．6g·L)孵育人脐静脉内皮细胞1h，再用OX．LDL刺激重要蛋白，可通过密闭小带ZO(zonulaoccuden)与细胞4h，用Westernblot及免疫荧光法检测JAM．A、Cx43的细胞骨架相连，具有调节血管渗透性、参与白细胞迁表达。用白细胞迁移实验观察OX-LDL损伤内皮细胞以及银移等功能。临床研究_2表明动脉粥样硬化患者血杏内酯B对单核细胞向内皮细胞下迁移的影响。结果①OX-LDL刺激内皮细胞4h，JAM-A表达增加了22％，Cx43表浆中JAM_A的水平明显增高，TNFot促进内皮细胞达增加了24％，银杏内酯B处理的细胞JAM—A、Cx43表达明JAM—A的表达，从而

4、增强血小板与内皮细胞黏附。显降低。免疫荧光检测获得了同样的结果。②PI3K特异性Cx43(connexin43)是组成缝隙连接的基本单位，在抑制剂LY294002同样抑制了OX—LDL刺激的JAM．A、Cx43相邻细胞之间形成通道结构，允许可溶性小分子在表达，表明银杏内酯B降低JAM—A、Cx43表达与抑制Akt磷相邻细胞间通过，维持血管内皮的稳态。研究发酸化相关。③白细胞迁移实验表明，银杏内酯B明显减少现，早期动脉粥样硬化内膜增厚区Cx43明显增OX—LDL诱导的单核细胞向内皮细胞下迁移。结论银杏内多。本研究重点探讨OX—LDL损伤内皮细胞JAM．A酯B能抑制OX-LDL刺激的内皮细

5、胞连接蛋白JAM—A、Cx43和Cx43的变化以及药物干预的影响。表达，从而改善血管渗透性，减少白细胞迁移，分子机制可能银杏内酯B(ginkgolideB，GB)是血小板活化因与抑制PDK／Akt信号通路活化有关。子受体拮抗剂，我们先前的研究表明]，银杏内酯B对OX·LDL刺激的内皮细胞损伤具有保护作用。然关键词：银杏内酯B；人脐静脉内皮细胞；JAM-A；Cx43；血管而，银杏内酯B是否能够改善内皮细胞连接蛋白的渗透性；炎症功能尚不清楚。本研究重点评价了银杏内酯B对OX-LDL刺激的内皮细胞JAM-A、Cx43表达的影响动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是一种慢性以及

6、分子机制，并通过白细胞迁移实验分析银杏内血管炎症性疾病J，其病理过程涉及血管内皮细胞酯B对血管渗透性的影响，从而揭示银杏内酯B减损伤、血小板活化、白细胞浸润等。内皮细胞受损在轻血管炎症反应的新的药理学作用。动脉粥样硬化过程中是一个主要的病理特征。生理1材料与方法状态下，内皮细胞通过细胞之间的紧密连接蛋白阻1．1药品与试剂银杏内酯B购自江苏大观园商止循环中的有害成分向血管内膜下渗透。在动脉粥贸公司，纯度为95％(批号：BAT2007115)。样硬化血管炎症的病理状态下，循环中的细胞因子LY294002、胶原酶、明胶购自Sigma公司；胰蛋白酶、和趋化因子增多，损伤内皮细胞连接蛋白功能，导

7、致特级胎牛血清购自Hyclone公司，Medium199培养收稿日期：2014一O1—26，修回Et期：2014—02—29基购自Gibco(Invitrogen公司)。Transwell小室购自基金项目：国家自然科学基金资助项目(No81070231，81270379)Coming公司。B—actin抗体购自SantaCruz公司；作者简介：刘雪青(1986一)，女，硕士生，研究方向血管疾病相关JAM·A抗体购自Epitomics公司；Cx4