旱冬瓜遗传多样性的RAPD分析

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1、摘要：遗传多样性是林木遗传育种的物质基础。但是，传统林术遗传育种主要考虑遗传增益。而忽视了林木遗传多样性问题，导致了一些严重问题的出现。现在，林木育种学家已经意识到，长期育种应以维持育种群体遗传变异为主要目的，以物种生物学、群体遗传学和居群生态学为理论基础。早冬瓜(Alnusnepaler,sisD．Don)是云南省重要的造林、用材树种，但是林分退化相当严重，影响了该树种的利用价值。因此对其进行遗传改良非常必要。本论文运用RAPD标记技术对旱冬瓜种群遗传多样性进行研究，希望可以为该树种的遗传改良策略定制提供科学的依据。主要结论如下：(1)利用CrAB法成功抽提出符

2、合实验要求的DNA样品。(2)建立了旱冬瓜RAPD分析技术体系：25ul反应体系中，含lxBuffer，1．9mM／LMgCl2，n3pM随机5

3、物，0．25mM／LDNTPs，1．25UTaq，20ngDNA摸板。反应程序为：94℃预变性4min，然后执行40个扩增循坏，每个循环中，94。C变性40s，36℃退火40s，72℃延伸1rain。最后72℃延伸10mla。(3)采用16个引物对分布于云南省的4个早冬瓜群体共60个个体进行了RAPD扩增和分析，得出物种水平的多态条带百分率(PPB)为52．舛％，Nei的基因多样度(Ht)为O．1268。分子方差分析(A

4、MOVA)表明。在总遗传变异中，群体内遗传变异占96．91％；POPGENE给出的基因分化系数(Gst)为0．0751：物种的遗传变异主要存在于群体内。(4)早冬瓜属风媒植物，借助风力可将花粉传送到很远的距离。因此，备群体之闻存在频繁的基因交流，这是群体之问盼遗传差异非常小(3．09％，AMOVA；7．51％，POPGENE)的最重要原因。另外，如果在试验取样过程中再合理些，可能会使试验结果更糖确。关键词：旱冬瓜，遗传多样性，遗传结构，遗传变异，RAPDAbstract：Geneticdiversityisthesubstantialbasisoftreebree

5、ding．However，thetleebreedersusedtopaymoreattentiontogeneticgainintraditionaltreebreedingandignoretheroleofgeneticdiversity，thisledsomeseriousproblem．Now,theyaremoreandmoreawarethatlongtermbreedingshouldaimatmaintaininggeneticvariationofforestpopulations．ThepropeRyanddevelopingtendency

6、offorestpopulationsshouldbestudiedmainly．A／nusnepalensisD．DonisoneofthemostimportantafforestationspeciesinYunnenprovince．Buttheseriousdegradationofthepopulationshavestronglyreduceditsvalueinuse．So．itisnecessarytodosomeworkonthegeneticimprovementofthespecies．Togivesomescientificfoundat

7、ionsforthemakingofgeneticimprovementstrategy，theauthorstudiedthegeneticdiversityofA／nusnepalensisD．DonthroughRAPDmolecularmarker．Theresultsasfollowing：(1)TheDNAextracfionandpurificationofA／nusnepalensisD．DonhasbeenmadesuccessfullybymeansofimprovedCTAB．(2)ThereliableRAPDanalysissystemw

8、asestablished．Thereactionvelumis25u1．Reactionmixtureconsistwith20ngDNA,0．25uM，LofesehdNTPs。1。9mM／LMgCt2，0．3pMrandomprimerand1．25UTaqpolymerase．RAPDprogramis：4rainat94℃forpredenaturation；then40cycleof40sat94℃fordenaturation，40sat36"Cforannealing,60sat72℃forextension；finallyextensionat7

9、2℃for