近江牡蛎多肽的分离纯化及其抗氧化、抗光老化活性研究

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1、硕士学位论文近江牡蛎多肽的分离纯化及其抗氧化、抗光老化活性研究作者姓名叶昱辉学科专业食品科学与工程指导教师游丽君副研究员所在学院食品科学与工程学院论文提交日期2018.6.10PurificationofOstrearivularispeptidesandtheirantioxidant,antiphotoagingactivitiesADissertationSubmittedfortheDegreeofMasterCandidate：YuhuiYeSupervisor：AssociateProfesso

2、rLijunYouSouthChinaUniversityofTechnologyGuangzhou,China分类号：学校代号：10561学号：201520120913华南理工大学硕士学位论文近江牡蛎多肽的分离纯化及其抗氧化、抗光老化活性研究作者姓名：叶昱辉指导教师姓名、职称：游丽君副研究员申请学位级别：工学硕士学科专业名称：食品科学与工程研究方向：食品营养与健康论文提交日期：2018年6月10日论文答辩日期：2018年5月29日学位授予单位：华南理工大学学位授予日期：2018年6月24日答辩委员会成员：

3、主席：莫树平教授级高工委员：赵海锋研究员郑必胜副教授赵振刚副教授游丽君副研究员摘要近江牡蛎(Ostrearivularis)属于软体动物门，瓣鳃纲，牡蛎科。广泛分布于我国的南北沿海，其中广东沿海地区对近江牡蛎的养殖有三百余年的悠久历史。牡蛎肉味鲜美，营养价值极高，具有“海中牛奶”的美称。牡蛎多肽也具有着良好的生物活性，可用于功能食品的开发。本文运用酶解法制备近江牡蛎多肽，对其进行分离纯化和结构鉴定，并评价了其抗氧化和抗光老化活性。主要研究结果如下：（1）首先测定了近江牡蛎原料的基本化学组成，结果表明其含有水

4、分62.67%，粗蛋白11.12%，总糖3.97%，灰分1.73%，因蛋白含量较高，故适合作为酶解底物。采用Alcalase2.4L酶解法制备近江牡蛎多肽，运用响应面优化酶解工艺条件，得到的最佳工艺条件为：酶解时间为5.19h，pH值为8.31，加酶量为2.12%，所得酶解产物命名为OP，其ORAC值为405.53TEμmol/g，蛋白质回收率为64.5±0.6%。（2）运用膜超滤法纯化近江牡蛎多肽OP，得到两个组分OP-Ⅰ（＜5kDa）和OP-Ⅱ（＞5kDa）。OP-Ⅰ的蛋白质回收率为70.2%，为主要成

5、分，且ORAC活性显著高于OP-Ⅱ（p<0.05）。采用SephadexG-25葡聚糖凝胶柱对OP-Ⅰ进行分离纯化，得到组分OP-Ⅰa、OP-Ⅰb。对组分OP-Ⅰa进行UPLC-MS/MS结构解析，检测到其中含有13条多肽序列，以七肽居多，其序列分别为AHGAGVGE、GHVKDAT、PGNLKSAK、HVHNGRT、CSMANAV、WWGHKLDT、AGDDAPR、CTGPATCKCGSG、VKVYIAG、EAPLNPK、AGDDAPRA、TTLGDLIH、GILGLSKLLGD。（3）对多肽组分进行体外

6、抗氧化活性评价（包括还原力、羟基自由基清除能力、超氧阴离子自由基清除能力、DPPH、ABTS自由基清除能力），发现组分OP-Ⅰa的抗氧化能力明显优于组分OP-Ⅰb。（4）组分OP-Ⅰa能显著提升UV辐照后的HaCaT细胞活力（p<0.05），并呈现较好的剂量相关性。OP-Ⅰa在500μg/mL的浓度下能够显著抑制细胞活性氧自由基（ROS）的生成（p<0.05）。（5）组分OP-Ⅰa通过MAPKs信号传导通路减轻HaCaT细胞的光老化损伤。UV辐照激发ROS的产生，ROS激活IL-1β、IL-6、IL-8炎症

7、因子的释放。从而诱导p38MAPK的磷酸化，促使c-Jun和c-Fos基因的表达，使其形成AP-1异源二聚体，发挥生物效应。同时，NF-κβ基因的表达上调，促进炎症因子的释放。OP-Ⅰa可以显著下调上述通路靶I点基因的表达，从而调控HaCaT细胞的抗光老化效应。关键词：近江牡蛎多肽；分离纯化；抗氧化；抗光老化IIABSTRACTOstrearivularisbelongstomolluskphyllobranchial,oysterfamily.Itiswidelydistributedinthenorth

8、andsouthcoastalareasofChina.ThecoastalareaofGuangdonghasalonghistoryofbreeding(nearlythreehundredyears).Oystermeatisdelicious,withhighnutritionalvalueand"seamilk"reputation.Oysterpeptidesalsohavegoodbioactivi