分离纯化、结构与抗氧化活性的研究

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1、福建农林大学博士学位论文余甘多糖分离纯化、结构与抗氧化活性研究中文摘要摘要余甘（PhyllanthusemblicaL.）是大戟科叶下珠属植物，是世界卫生组织指定在世界范围内推广种植的3种保健植物之一，2002年被我国卫生部确定为药食两用植物，是我国的传统民族用药。余甘多糖是余甘的主要活性成分，具有抗肿瘤和抗氧化生物活性。目前对余甘多糖的研究主要侧重于精多糖药理活性探索，对其活性级分及结构研究较少，且不够深入。本文以余甘主栽品种“粉甘”果实为研究对象，对余甘多糖的提取技术、分离纯化方法、结构信息以及多糖抗氧化活性进行了系统研究，研究结果如下：从余甘中提取出粗多糖，其糖

2、含量为31.13%；粗多糖经冻融分级、脱色素、除蛋白、透析和凝胶柱层析等初步分级纯化后，得白色丝状余甘精制多糖EPS，多糖收率10.33%；EPS的化学组成为：中性糖61.67%，糖醛酸26.04%，蛋白质1.98%，中性糖由Gal、Rha、Ara、Glc、Xyl和少量Man组成，糖醛酸为GalA。研究了余甘多糖的超声波强化提取和微波辅助萃取工艺。超声波提取最佳工艺参数：超声波提取温度80℃、超声波时间70min、超声波功率475W、料液比1:20；微波前处理-热水浸提法最佳工艺参数：微波前处理功率480W，微波处理时间60s，热水浸提温度90℃，浸提时间4h。对水提

3、余甘精多糖的分级纯化方法和化学组成进行了研究。EPS经DEAE-SepharoseCL-6B柱层析分级后得到2个多糖级分EPS1和EPS2；EPS1为中性多糖，经HPGFC分级后得到2个多糖级分EPS1-1和EPS1-2；EPS2为分子量均一的酸性多糖，；EPS1-1、EPS1-2和EPS2分别占总洗脱量的3.39%、19.60%和77.01%，总回收率92.32%。EPS1-1是一种中性多糖，相对分子质量约为123KDa，纯度98.53%，总糖95.09%，主要由Gal、Glc组成；EPS1-2总糖含量96.66%，纯度98.91%，分子量约为15KDa，是一种中性

4、多糖，主要由Gal、Glc和Xyl组成；IR光谱显示EPS1-1和EPS1-2是β构型的吡喃醛糖。EPS2是一种酸性多糖，含有79.01%的半乳糖醛酸，总糖含量97.53%，相对分子质量约为140KDa，纯度98.96%，主要由GalA、Gal和Rha组成，还有少量的Ara；单糖组成结合IR图谱确定EPS2是一种果胶多糖，多糖分子以α-糖苷键为主，并含有一定量的β-糖苷键。III福建农林大学博士学位论文余甘多糖分离纯化、结构与抗氧化活性研究中文摘要应用NMR、GC-MS、FT-IR、GC、HPLC等仪器分析技术，配合部分酸水解、甲基化分析等经典化学方法研究了余甘多糖E

5、PS1-2和EPS2的化学结构。EPS1-2的结构特征为：糖残基构型主要是1,4-，1,6-β-D-Galp、T-，1,4-，1,3,6-β-D-Glcp以及1,3,6-，1,2-β-D-Manp；主链由Galp和Glcp连接形成半乳葡聚糖，（1→）-β-D-Glcp为主链的非还原性末端残基，主链每五个糖残基中有一个分支；由1,6-β-D-Glcp通过O-3位与1,3,6-，1,2-β-D-Manp等中性糖侧链相连；Manp残基处于支链位置，1,3,6-Manp处于支链的核心区域。EPS1-2主要由β-构型构成，含有少量α-构型。部分糖残基被乙酰基取代。EPS1-2重

6、复结构单位可能为：→4)-β-D-Galp-(1→4)-β-D-Galp-(1→6)-α-D-Glcp-(1→4)-β-D-Glcp-(1→4↑1β-D-Manp2↑1α-D-GlcpEPS2一种典型的果胶多糖，主链由1,4-D-GalpA线性连接形成半乳糖醛酸聚糖，由1,4-D-GalpA通过O-4位与1,2-、1,2,4-L-Rhap的O-1位交替连接形成含有较多分支的鼠李糖半乳糖醛酸聚糖。半乳糖醛酸聚糖链部分羧基被甲酯化，部分O-2或O-3位被乙酰基取代。T-、1,6-、1,3,6-α-Galp和T-、1,5-α-Araf聚合形成的阿拉伯半乳聚糖以及半乳聚糖是E

7、PS2侧链的主要组成，通过Rhap残基的O-4位与主链相连。T-α-GalpA、T-α-L-Araf和T-β-Galp位于非还原性末端。EPS2可能的一种分子结构为：→2)-α-L-Rhap-(1→[4)-α-D-GalpA-(1]n→2)-α-L-Rhap-(1→4)-α-D-GalpA-(1→2)-α-L-Rhap-(1→4)-α-D-GalpA-(1→44↑↑11β-D-Galpα-L-Araf65↑↑11α-D-GalpA-(1→3)-β-D-Galpβ-D-Galp6↑1β-D-GalpIV福建农林大学博士学位论文余甘多糖分离纯化、结构与抗