NLRP3炎性小体活化在急性与慢性肾损伤中作用及机制的研究 (1)

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1、学校代码：10286分类号：R692.5密级：公开NLRP3UDC：616学号：159259炎性小体活化在急性与慢性肾损伤中作用及机制NLRP3炎性小体活化在急性与慢性肾损伤中的研究作用及机制的研究研究生姓名：闻毅导师姓名：刘必成东申请学位类别医学博士学位授予单位东南大学南大学一级学科名称临床医学论文答辩日期2018年7月10日二级学科名称内科学学位授予日期20年月日答辩委员会主席张爱华教授评阅人盲审2018年8月20日博士毕业论文NLRP3炎性小体活化在急性与慢性肾损伤中作用及机制的研究专业名称

2、：内科学（肾脏病学）研究生姓名：闻毅1导师姓名：刘必成1本论文获国家自然科学基金（81720108007；81670696；81470997）和江苏省临床医学研究中心（BL2014080）资助。EffectandmechanismofNLRP3inflammasomeactivationinacuteandchronickidneydiseaseADissertationSubmittedtoSoutheastUniversityFortheAcademicDegreeofDoctorofMedi

3、cineBYWENYiSupervisedbyProf.LiuBi-ChengMay2018东南大学学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研宄工作及取得的研究成果。尽我，所知除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研宄成果一，也不包含为获得东南大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我同工作的同志对本研究所做＇的任何贡献均己在论文中作ｔ明￥的说明并表示了谢意。研究生签名：日期：ｙＵ东南大学学位论文使用授权

4、声明东南大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、《中国学术期刊（光盘版）》电子杂志社有限公司、万方数据电子出版社、北京万方数据股份有限公司有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可以公布（包括以电子信息形式刊登）论文的全部内容或中、英文摘要等部分内容。论文的公布（包括以电子信息形式刊登）授权东南大学研宄生院办理。．研究生签名导师签

5、＃：日期中文摘要中文摘要NLRP3炎性小体活化在急性与慢性肾损伤中作用及机制的研究东南大学医学院东南大学肾脏病研究所研究生：闻毅导师：刘必成目的：炎症反应是急慢性肾损伤的共同特征，炎症反应持续存在会引起肾小管间质纤维化的形成。NOD样受体（Nod-likereceptor，NLR）家族是固有免疫的重要成员，通过识别病原相关分子模式（pathogen-associatedmolecularpatterns,PAMP）或损伤相关分子模式（damage-associatedmolecularpa

6、tterns,DAMP）激活下游炎症信号通路，进而引起炎症反应。NLRP3是NLR家族中研究最为广泛的成员，在PAMP或DMAP的刺激下活化，促进下游炎症因子IL-1β和IL-18的成熟和释放，加重组织炎症和损伤。但是NLRP3炎性小体在肾损伤后炎症反应发生中的作用及调节机制仍不十分清楚。本研究拟通过体内、体外实验，探讨NLRP3炎性小体在急、慢性肾损伤后肾组织炎症反应中的作用，并探讨其可能的调节机制。方法：1.在NLRP3炎性小体在缺血性急性肾损伤中的作用研究中，我们运用成年雄性野生型或NLRP

7、3敲除小鼠构建肾脏缺血再灌注模型。分组后，分别夹闭肾蒂25分钟或仅做开关腹处理。3天后处死小鼠并收集血、尿和组织标本，检测血尿指标变化；PAS染色观察肾组织病理改变；免疫组化染色观察NLRP3蛋白的表达和分布；运用Real-timePCR和WesternBlot技术检测肾组织中NLRP3炎性小体组分和炎症因子的表达水平。体外实验中，运用不同时间的缺氧刺激HK-2细胞，观察NLRP3炎性小体的表达；激光共聚焦显微镜检测HK-2细胞内NLRP3的表达，线粒体来源ROS的表达，线粒体膜电位的变化，以及N

8、LRP3与线粒体的共定位情况；使用siRNA技术沉默TXNIP或NLRP3，观察缺氧复氧损伤后HK-2细胞内NLRP3炎性小体的表达；运用线粒体特异性ROS清除剂MitoTEMPO干预HK-2细胞，观察缺氧复氧损伤后HK-2细胞内NLRP3炎性小体的表达。2.在NLRP3炎性小体在AngII灌注诱导肾损伤的作用研究中，我们运用成年雄性野生型、I中文摘要AT1R敲除或NLRP3敲除小鼠构建AngII灌注损伤模型。28天后处死小鼠并收集血、尿和组织标本，检测血尿指标变化；PAS染色观察