rgc‐32在急性肾损伤肾小管修复中的作用及可能机制 (1)

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1、第一部分：RGC‐32在急性肾损伤大鼠肾组织中的表达及意义【目的】：通过建立大鼠AIKI模型，观察RGC‐32在AIKI大鼠肾组织中表达变化与分布规律，了解RGC‐32在AIKI中的意义。【方法】：采用国际公认的双侧肾蒂夹闭法建立AIKI模型，SD大鼠随机分组：（1）模型组（AIKI组）（n=64）：分离大鼠双侧肾蒂，持续阻断45min。并分别于肾脏缺血再灌注后2h、6h、24h、48h、72h、1w、2w、4w分别处死大鼠8只。通过腹主动脉采血检测血清肌酐（SerumCreatinine,Scr）水平。留取肾脏组织，通过实时荧光定量PCR、Westernblotting以及免

2、疫组织化学法明确肾组织损伤程度及RGC‐32表达变化与分布规律。（2）假手术组（sham组）（n=64）：仅分离双侧肾蒂而不进行肾蒂阻断，其余操作同AIKI组。【结果】：（1）通过免疫组织化学方法发现：正常大鼠肾组织中RGC‐32主要表达于近端小管、远端小管及集合管上皮细胞，肾小球仅有微弱表达；RGC‐32在肾小管间质及肾脏血管无表达。（2）AIKI组缺血再灌注后2h、6h、24h、48h、72h、1w、2w、4wRGC‐32蛋白相对表达水平分别为0.0168±0.0029,0.0156±0.0021,0.0065±0.0013,0.0075±0.0013,0.0096±0.0

3、014,0.0132±0.0016,0.0169±0.0014,0.0179±0.0022。其中缺血再灌注后24h、48h、72h两组间RGC‐32蛋白表达水平差异具有显著统计学意义（P<0.01）。RGC‐32mRNA表达水平变化与免疫组化结果相符。RGC‐32蛋白表达与肾小管‐间质损伤评分存在显著负相关（r= ‐0.514，P<0.01）。【结论】：（1）首次发现RGC‐32蛋白在正常SD大鼠肾组织中主要表达于肾小管上皮细胞胞浆，肾小球系膜细胞可有微弱表达，肾血管及肾小管间质无表达。II万方数据（2）大鼠肾脏缺血再灌注后，RGC‐32于再灌注后24h‐72h表达水平明显降低

4、。RGC‐32可能在AKI发生发展过程中发挥重要作用。【关键词】：急性缺血缺氧再灌注损伤；急性肾损伤；补体应答基因‐32；肾脏；大鼠第二部分：RGC‐32通过细胞周期参与肾小管上皮细胞损伤及修复过程【目的】：通过体外肾小管损伤模型，研究RGC‐32对肾小管上皮细胞周期影响以及参与肾小管上皮细胞损伤修复过程的作用。【方法】：（1）体外培养NRK‐52E细胞，TNF‐α（10ng/ml）干预制备体外肾小管上皮细胞损伤模型并鉴定。（2）采用瞬时转染技术分别转染RGC‐32真核表达载体和RGC‐32siRNA，制备RGC‐32高表达组及RGC‐32敲低组，验证转染效果。（3）通过流式细

5、胞仪，检测RGC‐32高表达组及RGC‐32敲低组细胞周期变化。（4）Westernblotting方法检测各组细胞损伤标志物及细胞外基质表达。【结果】：（1）与对照组相比，RGC‐32敲低组G2/M期比例明显增多（P<0.05）；RGC‐32高表达组S期比例明显增加（与空白质粒对照组比较P<0.05）且不影响G2/M期。（2）与对照组相比，RGC‐32敲低组细胞损伤标志物NGAL、KIM‐1及细胞外基质α‐SMA、Fibronectin表达明显增高。【结论】：RGC‐32可能通过调控细胞周期G2/M期在肾小管上皮细胞损伤修复过程中发挥重要作用，其确切机制有待进一步阐明。【关键

6、词】：补体应答基因‐32；细胞周期；G2/M检测点；肾小管纤维化III万方数据ABSTRACTPart1:TheExpressionandSignificanceofResponseGenetoComplement32inRatwithAcuteKidneyInjuryObjective:ToinvestigatetheexpressionofResponseGenetoComplement32(RGC‐32)inratwithacutekidneyinjury(AKI),andtoexploretheroleofRGC‐32inrenalinjuryinducedbyisch

7、emiareperfusion.Methods:SpragueDawleyratswererandomlydividedinto2groups,includingshamoperationgroup(n=64)andacuteischemiareperfusioninjury(IRI)group(n=64).Ratsweresacrificedfollowingreperfusion2h,6h,24h,48h,72h,1week(w),2wand4w.Serumsamplesweretake