夹脊电针调控脊髓损伤模型大鼠微环境NLRP3炎症小体活化作用及机制研究

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时间:2018-10-15

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1、黑龙江中医药火学博上学位论文中文摘要目的:通过实验研究明确夹脊电针对脊髓损伤大鼠NLRP3炎症小体活化及运动功能的影响,阐明夹脊电针通过调控P2X7R抑制NLRP3炎症小体活化,降低脊髓损伤后炎症反应的作用机制,为夹脊电针临床应用提供实验依据。方法:实验研究分为四部分。?实验:观察夹脊电针对SCI大鼠运动功能及ff髓组织病现形态学的影响。采川随机数字表法将36只雌性SD人鼠分成假于术组(Sham)、模型组(Model)和夹脊电针组(EA)3组,毎组根掂术C3d

2、、7d时间点分为2个亚组,每个亚组6只大鼠,分别给予相应的处贾或治疗。运用BBB评分法观察各组大鼠运动功能;HE染色观察各组大鼠脊髓纟H织病理形态学变化。明确夹脊电针对SCI大鼠行为学和形态学的影响。--实验二SCI1ILi:观察夹脊电针对大鼠脊髓组织促炎性因子IL8和p表达的影响。采用随机数字表法将36只雌性SD大鼠分成假手术组(Sham)、模型组(Model)和夹脊电针组(EA)3组,每组根据术后3d、7d时间点2个亚组,每个亚组6只大鼠,分别给予相应的处

3、置或治疗分为。ELISA--法检测大鼠脊髓组织IL18和ILi表达SCI太p。明确夹脊屯针对鼠脊髓组织促炎性因子表达的影响。实验三IP3:观察夹脊电针对SC大鼠脊髓组织NLR炎症小体活化的影响36只雌性SD大鼠分成假(Sham)、模。采用随机数字表法将手术组型组odel)和夹脊电针组(EA)3组,每组根据术后3d、7d时间点分(M为2个亚组,每个亚组6只大鼠,分别给予相应的处置或治疗IHC法检。3-测大鼠脊髓组织NLRP、ASC、cleavedcaspase1表达。明确

4、夹脊电针抑制SCI大鼠脊髓组织NLRP3炎症小体活化的作用。实验四:观察夹脊电针对SCI大鼠脊髓组织P2X7受体表达及NLRP3炎症小体活化的影响。采用随机数字表法将48只大鼠分成假手术组)(Sham)(Model)、()Ci(BBG、模型组夹脊电针组EA和BB注射组3黑龙江中医药大学博士学位论文共4组,每组根据术后3d、7d时间点分为2个亚组,每个亚组6只火鼠,分别给予相应的处置或治疗IHC法检测火鼠脊髓组织P2X7R表达。;Westernb-lot法检

5、测大鼠脊髓组织P2X7R、NLRP3、ASC、cleavedcaspase1蛋白表达。从P2X7受体介导NLRP3炎症小体活化角度揭示夹脊电针改善SCI大鼠炎症反应的作用机制。结果:一实验:(1)BBB评分法观察各组大鼠运动功能:Sham组大鼠术后未见明显运动功能障碍,术后3d、7dBBB评分均为21分。Model组人鼠术后出现严重的后肢运动功能障碍,术后3d、7dBBB评分均明V降低,句Sham组比较,差异具有统计学意义(尸<0.05)。EA^人鼠术f3d、

6、7dBBB评分<有所升高,与Model组比较,差异具有统计学意义(P0.05)。(2)HE染色观察各组大鼠脊髓组织病理形态学变化:Sham组大鼠脊髓组织结构完整,灰质和白质界限清晰,细胞核形态正常,核仁大而清晰。ode,未见炎性细胞浸润、出血坏死、组织水肿等M丨组3d时人鼠脊髓组织可见明显斑片状出血,组织疏松,有空泡形成,仅见残存的祌经细胞,细胞形态改变明显,胞体变小,胞核固缩,可见大量炎性细胞浸润,可见一,EA部分浆细胞呈核固缩、核染色加深偏于细胞侧,胶质细胞增多。

7、组3d时大鼠脊髓组织病理改变与Mode1组类似,可见点片状小出血灶,组织疏松,神经细胞数量较Model组增名,炎性细胞浸润及胶桢细胞增多情况较Model组减轻。Model组7d时脊髓组织疏松严重,人景空泡形成,?白质呈空泡退变样变化,残存神经细胞进步减少,人M炎性细胞浸润及_A组7??胶质细胞增生d时],。E可见组织结构趋完整灰质和丨1质界限隐约可见,组织空泡少见,炎性细胞及胶质细胞减少,取而代之以大量形状不规则的神经细胞,胞体及胞核正常。二实验:-EUS-A法检测

8、各组大鼠脊髓组织IL18和IL13表达情况am组:Sh大(--IL1鼠脊髓组织可见少量18和ILP表达,且术后3d、7d维持在稳定水平。_--f术后3(1、7〇1时间点,模型组大鼠脊髓组织IL18和IL13表达,Sham|高与(<组比较.)EA组,差异具有统计学意义(P〇05。给予夹脊电针治疗后,大4黑龙江中医药大学博士学位论文IL-1I-17dMo鼠脊髓组织8和LP表达下降,术/n时间点,与del组比较,差异

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